學位論文
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Item 以氰丙基液相層析質譜技術精進目標代謝體學與途徑解析(2025) 廖琬柔; Liao, Wan-Rou代謝體學探討生物體內小分子代謝物的組成，透過高效能液相層析串聯式質譜儀定性與定量分析，獲取全面性的代謝途徑變化，有助於疾病早期診斷及發現有效治療策略。本研究開發並應用氰丙基層析法，透過調整環境pH值，使目標物在5分鐘內達到良好分離，並成功建立生物分子分析平台。該平台探索了51種代謝物，涵蓋廣泛的生物途徑，包括核苷和核苷酸、氧化還原代謝體、糖解途徑、戊糖磷酸途徑、嘌呤合成途徑、氨基酸以及與神經疾病相關之代謝物。此外，透過在移動相中添加檸檬酸來防止分析物吸附在金屬表面，從而改善波峰形狀並提高靈敏度。質譜系統採用正負模式電噴灑游離法與多重反應監測模式。生物分析平台良好的精密度（RSD%< 15.1%）與準確度（回收率 81.3 - 117.8%），線性範圍1.0 - 2000 ng mL⁻¹，相關係數r > 0.99，偵測極限0.1至10 ng mL⁻¹，定量極限0.1至25 ng mL⁻¹。該平台應用於細胞、腦組織、血液與蜂王漿等檢體，以評估基質效應並驗證平台的可靠性。接著應用於dSH-SY5Y細胞之代謝分析，顯示在神經毒素6-OHDA的環境下，導致細胞內粒線體損傷，進而引起細胞內氧化壓力增加以及能量ATP減少，驗證其可行性與可靠性。接著進一步探討ENERGI在SH-SY5Y細胞與小鼠腦中的神經保護效果，展現其在疾病研究中的潛在應用。該生物分子分析平台具快速、高效且符合綠色化學原則，適用於食品、細胞、組織及生物流體的代謝物分析，成為解析生物體內代謝途徑的強大工具。