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    小根蒜萃取物對葡聚醣硫酸鈉誘導小鼠急性腸炎之保護效應
    (2022) 毛語葳; Mao, Yu-Wei
    發炎性腸道疾病 (inflammatory bowel disease) 是反覆發炎的慢性疾病，其致病因子涉及基因、環境、腸道上皮損傷、腸道菌群失衡與異常的免疫反應等。T細胞及其相關細胞激素的調節與平衡，為維持腸道免疫恆定之重要因子。本研究首先對於台灣花蓮原住民作物「火蔥」進行植株特徵比對及基因序列分析，結果鑑定此「火蔥」為小根蒜 (Allium macrostemon Bunge) 的鱗莖。小根蒜屬於石蒜科蔥屬之藥食兩用的植物，將小根蒜的鱗莖進行蒸煮、乾燥後做為傳統中藥的「薤白」。本研究以葡聚醣硫酸鈉 (dextran sulfate sodium, DSS) 誘導C57BL/6J小鼠急性腸炎模式，探討小根蒜的新鮮鱗莖萃取物是否具緩解腸炎之能力。首先製備小根蒜的水 (aqueous extract, AE) 與50%乙醇萃取物 (50% hydro-ethanolic extract, HEE) 進行實驗一，結果發現預先管餵小根蒜HEE (200 mg/kg/day)，可降低DSS引致急性腸炎小鼠的血液之嗜中性白血球次群、減少大腸組織免疫細胞浸潤、維持完整腸道上皮，具緩解急性腸炎的潛力；然而AE則無此效用。接續進行實驗二，探討補充小根蒜HEE減輕急性腸炎之效用與機轉。C57BL/6J小鼠分為4組：正常控制 (NC) 組、腸炎控制 (DC) 組，與腸炎並介入250 mg HEE/kg/day (DL) 組或500 mg HEE/kg/day (DH) 組。NC和DC組預先管餵水，而DL和DH組預先管餵HEE，經一週後再給予3% DSS飲水引致急性腸炎並持續管餵HEE，經一週後犧牲。實驗結果當與DC組比較，DL和DH組顯著降低血漿haptoglobin濃度；在血液嗜中性白血球、發炎性單核球和調節性T細胞之比率皆降低，以及淋巴球比率上升；脾臟調節型T細胞與輔助型T細胞17相關細胞激素與轉錄因子forkhead box p 3、interleukin (IL)-10、transforming growth factor-1、IL-17A和retinoic acid receptor-related orphan receptor gamma-t之mRNA表現量降低；大腸組織促發炎相關基因C-C chemokine ligand 2、tumor necrosis factor-和C-X-C motif chemokine ligand-1與腸道黏膜屏障相關保護因子trefoil factors 3之mRNA表現量，以及大腸沖洗液Immunoglobulin G的濃度皆降低，並發現DL和DH組有較低的疾病活動指數與大腸水腫程度，另於大腸組織切片觀察其腸道免疫細胞浸潤程度較低，且具有相對較完整的隱窩與腸道上皮。本研究結果顯示，預防性給予小根蒜HEE可透過免疫調節與抑制發炎反應，具有緩解急性腸炎的潛力。
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    富含三萜類之苦瓜葉萃取物預防性保護葡聚醣硫酸鈉引致小鼠慢性腸炎
    (2021) 黃安生; Huang, An-Sheng
    發炎性腸道疾病 (inflammatory bowel disease, IBD)是一種慢性、反覆性的腸道發炎性疾病。先前研究發現，自山苦瓜 (學名: Momordica charantia Linn. var. abbreviataSer.)葉片乙醇萃取物中，分離得到的富含三萜類區分萃取物 (triterpenoid-enriched extract, TEE)，可藉由調控輔助型T細胞 (helper T cells)和調節型T細胞 (regulatory T cells)，預防性緩解葡聚糖硫酸鈉 (dextran sulfate sodium, DSS)誘導小鼠急性腸炎的發炎反應，因此本研究欲進一步探討TEE是否具有治療或預防慢性腸炎的功用。本研究共進行兩次動物實驗，分述於下：實驗一為模擬治療模式，先連續7天給予C57BL/6J小鼠含有3% DSS飲水誘導腸炎後，於飼料中添加TEE (攝取劑量為100 mg/kg BW)或苦瓜葉粉末 (bitter melon leaf powder, BMLP；攝取劑量為1g/kg)持續餵食14天後犧牲，實驗期間每日紀錄體重變化，並於實驗結束後記錄器官重量，以及分析脾臟中免疫細胞與腸炎相關基因表現。實驗結果發現給予TEE或BMLP組與單獨給予DSS誘導組比較，給予TEE或BMLP並未顯著影響小鼠體重與器官重量變化、脾臟T細胞分化、腸炎相關基因和組織發炎評分，因此推斷TEE和BMLP在此劑量與實驗模式下，並無治療慢性腸炎的功效。實驗二為模擬預防模式先投與TEE，觀察TEE對於DSS誘導腸炎的急性後期與慢性期的影響。將C57BL/6J小鼠分為一般控制組 (NC組)、DSS誘導組 (DC組)、DSS+低劑量TEE (攝取劑量為100 mg/kg BW；DL組)與DSS+高劑量TEE (攝取劑量為150 mg/kg BW；DH組)。在DSS誘導腸炎前，先給予一周TEE，並分別於3% DSS誘導腸炎後第14天(急性後期)與第21天(慢性期)犧牲動物，從大腸組織切片觀察發現，與DC組比較，TEE組的組織發炎評分較低、腸道上皮結構較完整、以及嗜中性白血球的浸潤程度較低，且分杯狀細胞數量與分泌的黏液較多。由qPCR分析結果發現於誘導腸炎急性後期，給予TEE能提高大腸組織的MUC (mucin)2、ZO-1 (zonula occludens-1)、Occludin與Claudin-2 mRNA表現量，而大腸組織的MUC1、MUC4、TNF-α (tumor necrosis factor-α)、IL (interleukin)-1β與CXCL1 (chemokine (CXC motif) ligand) mRNA表現量也被TEE所抑制。於誘導腸炎慢性期時，TEE能降低大腸組織的TFF (trefoil factors)3、MUC4、TNF-α、IL-1β與CXCL1 mRNA表現量，並增加杯狀細胞數量與MUC2 mRNA的表現量。以上證據顯示TEE在大腸組織微環境具有預防性保護腸炎的效果。由流式細胞儀分析，結果發現TEE對於血液與脾臟之單核球、嗜中性球與T細胞分布並沒有顯著影響。綜合上述結果，推論TEE於大腸微環境中透過減少嗜中性白血球浸潤、減少促發炎因子、增加黏液與維持腸道屏障完整，而具有預防性保護慢性腸炎的作用。