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Item 基因體甲基化圖譜與抑癌基因甲基化參與肺癌形成之機制及臨床應用探討(2009) 張哲維; Chang, Jer-Wei癌症一般認為與基因體與外顯基因體發生變異有關，而在外顯基因體研究中，基因啟動子過度甲基化是最主要造成基因不活化的原因之一。抑癌基因的啟動子過度甲基化，會造成抑癌基因不活化，進而導致癌症的發生。為了鑑定在癌症基因體中，過度甲基化的區域所包含的可能新穎抑癌基因，本研究利用差異甲基化雜交法（differential methylation hybridization）的微陣列分析及染色質免疫沈澱晶片分析法（chromatin immunoprecipitation -on -chip），針對30位非小細胞肺癌病人及數個肺癌細胞株進行基因體的過度甲基化區域及染色質鬆緊狀態研究。結果發現在不同的肺癌子類型及肺癌分期，有特定的基因被過度甲基化，這些過度甲基化基因也許可以作為早期偵測及預測癌症發展的生物指標。 此外，在肺癌病人的差異甲基化雜交法的結果中，本研究發現一個與抗細胞增生、細胞靜止與細胞分化的COL14A1基因啟動子有過度甲基化的情形，而且在染色質免疫沈澱晶片分析法中，COL14A1啟動子的染色質區域相較於正常肺細胞，肺癌細胞呈現較為緊密的狀態。此外，本研究發現有60.4%的非小細胞肺癌病人有COL14A1基因啟動子過度甲基化的情形，而且其mRNA及蛋白質分別有50.0%及43.9%的低表達情形；另外本研究也發現COL14A1基因啟動子過度甲基化與晚期肺癌病人有統計相關。這些驗證實驗顯示外顯基因體研究是尋找癌症相關基因的有效工具，COL14A1基因及其蛋白變異參與肺癌的分子機制將進一步由細胞及動物模式研究來鑑定。 在本實驗室先前對基因體缺失的研究中，發現在染色體3p21的區域有高達50%以上的基因座缺失情形。此外，在差異甲基化雜交法的結果中，也發現位於染色體3p21.3的RASSF1基因在肺癌早期的病人中有過度甲基化情形，因此染色體3p21.3區域的基因不活化對於台灣地區肺癌形成扮演一個非常重要的角色。而RASSF1A及BLU這二個頭尾相連的抑癌基因位於染色體3p21.3的區域，由於這二個基因位置非常靠近，因此本研究預測這二個基因的表達及啟動子過度甲基化具有區域效應，也就是此二基因的表達及基因甲基化具有一致性。如果沒有區域效應，可能是因為RASSF1A及BLU基因之間具有絕緣子（insulator）構造所導致。首先，本研究針對32位肺癌病人，利用特定序列甲基化微陣列分析法（methylation- specific oligonucleotide microarray）及反轉錄聚合連鎖反應，找出會影響RASSF1A及BLU基因mRNA表達的關鍵轉錄CpG位置。同時也發現在RASSF1A基因的關鍵轉錄CpG位置上，有E2F1這個轉錄因子的結合，當這些位置被過度甲基化時，會使E2F1無法結合在RASSF1A的啟動子上，導致RASSF1A基因表達下降。此外，本研究發現RASSF1A及BLU這二個基因各自的關鍵轉錄 CpG位置的甲基化與各自基因的低轉錄與低轉譯有關；然而，這二個基因的甲基化狀態及基因表達卻沒有一致性，也就是沒有區域效應。利用免疫沈澱聚合連鎖反應（chromatin immunoprecipitation-PCR）證明CTCF蛋白結合在RASSF1A及BLU基因啟動子之間的絕緣子上，也利用亞硫酸鹽定序（bisulfite sequencing）發現在絕緣子兩端的甲基化不連續情形。所以CTCF也許提供了屏障效應導致這二個基因沒有所謂的區域效應。本研究找出了RASSF1A及BLU的關鍵轉錄CpG位置，這些位置的甲基化會影響基因的表達；同時也證明了CTCF結合在RASSF1A及BLU之間，使得這二個基因的表達沒有區域效應。本研究為首篇鑑定影響RASSF1A及BLU基因mRNA表達的關鍵轉錄CpG位置的報導，並提出絕緣子可以做為如染色體3p21基因群座（gene cluster）屏障效應的證據。Item 以肺癌細胞株與動物模式探討新穎的吲哚結構合成化合物1,1,3-tri(3-indolyl)cyclohexane抑制腫瘤細胞生長機制(2008) 李慶孝; Ching-Hsiao Lee目的：肺癌在世界各地無論男性或女性都是發病率、死亡率名列前茅的惡性腫瘤。因此，發現與合成新穎的肺癌治療抗癌藥物是刻不容緩的工作。材料與方法：本研究發展了一種新穎的吲哚結構合成化合物1,1,3-tri(3-indolyl)cyclohexane (3-indole)，設計使用二步法合成，該技術方法縮短製備過程，產品質量和產量也獲得提高，並藉由人類肺癌細胞株 (A549, H1299, H1435, CL1-1, and H1437) 來探討新穎抗癌藥物對於肺癌細胞的毒殺作用及其機制，同時進行前臨床動物實驗測試。結果：新穎的抗癌藥物3-indole經由不同濃度處理，可以誘導人類肺癌細胞株 (A549, H1299, H1435, CL1-1, and H1437) 進行細胞週期休止 (cell cycle arrest) 及細胞凋亡 (apoptosis)。細胞週期研究初步實驗結果顯示調控細胞週期休止的蛋白p53與p21表現增加，顯示p53/p21相關訊息傳遞路徑重要性。目前已知有兩個機轉可以調控細胞凋亡現象，第一個作用機轉是經由caspases (cysteine-dependent aspartate-specific proteases) 相關性機轉活化而引起細胞凋亡，目前已被認定有粒線體參與訊息傳遞的內在路徑與細胞外死亡訊息接受器作用的外在路徑；第二個機轉是經由caspases非相關性機轉。西方墨點法實驗結果顯示，調控細胞凋亡進行的促進凋亡蛋白Bax、Bad表現增加，抗凋亡蛋白Bcl-2表現下降，而粒線體細胞色素C釋放至細胞質情形也有增加，另外一方面，透過caspases活性分析實驗結果顯示，3-indole主要是藉由caspases-9、caspases-3參與粒線體訊息傳遞的內在路徑以誘發細胞凋亡發生。此外，3-indole誘導A549人類肺癌細胞株粒線體膜電位下降、活性氧分子 (reactive oxygen species, ROSs) 產量增加，與細胞生長調節相關MAPK (Mitogen-activated protein kinase) 家族分子c-Jun N端蛋白質激酶 (JNK) 表現增加，同時顯示有DNA損傷情形。進一步活性氧分子抑制劑實驗結果顯示，JNK表現與DNA損傷可部分減少。3-indole誘導細胞凋亡情形受到活性氧分子抑制劑或JNK訊息抑制劑阻斷，顯示活性氧分子與JNK壓力相關訊息傳遞路徑重要性。此外，初步實驗結果，其他生長調節相關訊息傳遞蛋白 (如Akt與p38/COX-2) 表現也受到3-indole抑制，顯示PI3K/Akt與p38/COX-2訊息傳遞路徑重要性。同時前臨床動物實驗測試結果顯示3-indole抑制A549及H1435肺癌細胞株生長。結論：3-indole在細胞模式與動物模式呈現具有抑制肺癌細胞株生長的作用，其誘導細胞死亡是透過ROS與JNK路徑之粒線體訊息傳遞的內在細胞凋亡，同時可誘導細胞週期休止以及抑制肺癌細胞株Akt與p38/COX-2的表現，顯示使用二步法合成，具有高質量和產量的3-indole具有發展作為新穎的抗癌症用藥的價值。Item 香菸致癌物透過AKT/GSK3β/βTrCP訊息路徑影響DNA甲基轉移酵素穩定性(2008) 謝翊萱; Yi-Shuan Hsieh研究背景:台灣地區不論女性或男性肺癌皆高居癌症死亡率之首位，而肺癌的發生與長期暴露於環境中的致癌物質有關，尤其是香菸中的成份nitrosamine 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone，簡稱NNK，被認為是造成肺癌主要的致癌物類型之一。NNK除了會導致DNA 的損害 (DNA damage) 外，近來研究也發現NNK 容易造成癌症形成過程中外顯基因變異 (epigenetic alteration)，使抑癌基因的啟動子上被過度甲基化。而造成啟動子CpG 位置上過度甲基化的DNA 甲基轉移酵素 (DNA methyltransferase, DNMT)DNMT1、DNMT 3a 及DNMT 3b，目前也已發現在癌細胞中有過度表現的情形。 研究目的: 本實驗室先前針對肺癌做了許多與抑癌基因CpG 過度甲基化相關的研究，並發現DNMTs 的過度表達與抽煙的肺癌病人有顯著的相關性，然而造成此現象的詳細機制仍不清楚。因此本篇研究目的為以細胞、臨床及動物模式探討香菸致癌物NNK 是透過何種機制而誘導DNMTs 表達，進而導致許多抑癌基因啟動子CpG位置過度甲基化的現象。 研究方法及結果: 首先在細胞模式由西方轉漬法 (Western Blot)發現處理香菸中的尼古丁 (nicotine) 6 小時後，會促使DNMT1 蛋白表現增加；而由nicotine 所衍生出來的致癌物NNK 則是在隨其處理濃度及時間增加，DNMT1 蛋白表現也隨之增加，尤其在10 μM NNK處理2 小時即有很明顯誘導效果；同時藉由外送DNMT1 載體表現分析實驗也得知NNK 會誘導外生性DNMT1 蛋白表現增加；然而透過反轉錄聚合酵素鏈反應 (RT-PCR) 得知NNK 處理2 小時並不會影響DNMT1 mRNA 的表達改變。進一步，處理可以抑制新蛋白質生成的轉譯抑制劑Cycloheximide 得知DNMT1 蛋白的半衰期大約6小時，但是同時受到NNK 刺激後，DNMT1 蛋白的半衰期增長為24 小時。本研究結果亦顯示nicotine 及NNK 在2 小時內與p-NFκB、p-AKT、p-ERK1/2 及p-p38 的訊息蛋白活化有關；更進一步由處理AKT抑制劑 (LY294002) 及AKT knock down 實驗得知NNK會透過AKT 訊息路徑影響DNMT1 蛋白表現的增加。由免疫沈澱法(Immunoprecipitation)、蛋白質降解抑制劑 (MG132) 處理等實驗證明NNK透過AKT訊息路徑影響泛素 (ubiquitin) 調節的蛋白質體降解系統而增加DNMT1 蛋白的穩定性；此外，更進一步利用GSK3β抑制劑及分別外送GSK3β、βTrCP 載體表現來驗證GSK3β/βTrCP路徑會促使DNMT1 蛋白降解，但NNK 則會活化AKT 而影響 GSK3β/βTrCP 路徑使DNMT1 不易被降解。由免疫沈澱法也首度證實DNMT1 蛋白會與GSK3β 及 βTrCP 蛋白結合，由此可知GSK3β/βTrCP 蛋白降解路徑的確會影響DNMT1 蛋白調控。接下來我們以染色質沈澱的聚合酶鏈鎖反應(chromatinimmunoprecipitation-polymerase chain reaction assay) 及聚合酵素鏈反應為基礎的甲基化分析 (methylation-specific PCR) 方法發現NNK 所誘導的DNMTs 表現會結合至抑癌基因啟動子區域，進而造成抑癌基因啟動子有過度甲基化的情形。 在動物模式實驗中，以免疫組織染色分析NNK 處理及未處理的老鼠肺組織切片，發現NNK 處理後所產生肺腫瘤組織的DNMT1、DNMT3B、p-AKT 與不活化態的p-GSK3β(ser9)蛋白表現比較高，而βTrCP 蛋白則有下降表現的情形。 在臨床研究方面，我們以免疫組織染色分析(Immunohistochemistry)偵測109 位臨床肺癌病人DNA 甲基轉移酵素表現量，發現曾經吸煙但後來有戒煙病人的DNMT1 蛋白過度表現情形 (31.1%) 比持續吸煙病人的DNMT1 蛋白過度表現情形 (69.4%) 明顯來的低 (P 值=0.001)。 結論: 由以上細胞、臨床及動物模式實驗結果顯示，香菸中致癌物NNK 的確會誘導DNMTs 蛋白表現的增加；進一步由細胞實驗結果也知NNK 會透過AKT 訊息路徑削弱GSK3β/βTrCP 調控DNMT1 蛋白降解作用，進而使DNMT1 蛋白質穩定性增加；而這些NNK 所誘導的DNMTs 蛋白也會結合到抑癌基因的啟動子位置上，進而導致抑癌基因啟動子產生過度甲基化的情形，因此成為導致肺癌發生的原因之一。Item GAS7基因於肺癌之分子變異及臨床相關性研究(2008) 陸一麟; LU, YI-LIN自1982年起，癌症即為台灣地區十大死亡原因之第一位，其中肺癌不論在女性或男性都高居癌症死亡率的首位，儘管目前醫學已相當進步，但對於分子致癌機制仍未完全釐清。目前所知，癌症形成的原因，是由於多重基因發生變異所造成，其中大家所熟知和癌症有關的為抑癌基因 (tumor suppressor gene) 及致癌基因 (oncogene)。因此，抑癌基因變異的研究有助於了解癌症形成的機制。 研究目的：Growth arrest-specific 7 (GAS7) 這個蛋白質為GAS這個基因家族的其中一個成員，主要功能可能與調控細胞週期有關；前人研究報導顯示，GAS7可能在細胞中扮演一抑癌基因的角色。因此，本研究目的在探討GAS7基因在台灣地區非小細胞肺癌 (non-small cell lung cancer) 病人細胞中之變異情形：利用免疫組織化學染色法，觀察病人組織切片中GAS7蛋白表現情形，再以反轉錄—聚合酵素鏈反應分析組織細胞中mRNA轉錄是否異常，續以甲基化為基礎的定序反應以及微衛星基因座鑑定法分別偵測GAS7基因的促進子過度甲基化頻率和基因座缺失頻率。 結果: 本研究以免疫組織化學染色法發現75位NSCLC病人中GAS7蛋白低表達頻率為57.3% (43/75)，以31位病人之組織進行西方轉漬法發現三種主要的蛋白形式，分別依分子量大至小為GAS7C、7B和7A，其GAS7C蛋白低表現之比例為48.4% (15/31)，GAS7B蛋白低表現之比例為40.7% (11/27)，而GAS7A蛋白幾乎不表現；GAS7 mRNA isoform: GAS7C和GAS7B低表達頻率分別為20.9% (19/91)和32.6% (30/92)，而GAS7C和7B啟動子甲基化頻率分別為16.7% (6/36) 和65.6% (21/32)。GAS7基因座缺失的頻率在位於基因上、下游兩微衛星序列取聯集後為20.7% (18/87)。GAS7蛋白質/mRNA、GAS7C和7B之mRNA/啟動子甲基化的數據彼此間都呈現統計上的顯著相關性 (P<0.05)。利用西方轉漬膠片中相對於GAS7C分子量之蛋白進行膠體內水解、trypsin反應及質譜分析，本研究證實其為GAS7C蛋白。同時，我們藉由不同肺細胞株一系列的基因及蛋白質實驗，我們發現GAS7蛋白不同isoforms如GAS7C和7B，表達的量與細胞內的位置也都不同。 結論：本研究證實GAS7基因在台灣地區肺癌形成過程中扮演一個類似抑癌基因的角色，其中GAS7C為主要的變異蛋白，其變異主要機制為啟動子過度甲基化及基因座缺失，而 GAS7C 蛋白則可以在生長較為緩慢之正常肺細胞表現，此研究也是首篇證實GAS7C isoform可以在人類細胞中表現之論文。Item 組蛋白去乙醯酶抑制劑抑制肺癌細胞生長之機制探討(2007) 溫偉伶; Wei-Ling Wen目的：前人研究顯示，在一些固體或血液腫瘤中，組蛋白去乙醯酶 (Histone deacetylases, HDACs) 常不正常活化；故引發出在癌症的治療中將 HDAC 作為癌症治療標靶的想法。本研究即探討新穎HDAC抑制劑：HDAC-44 與 HTPB 是否可以有效的抑制肺癌細胞的生長，以及其抑制癌細胞生長的分子機制。材料與方法：利用 trypan blue exclusion 的方法檢測 HDAC-44 與 HTPB 單獨處理下，對正常細胞或肺癌細胞的細胞毒殺性；或是將 HDAC-44 與 cisplatin 共同處理肺癌細胞株，檢測其對肺癌細胞株是否有加成性的細胞毒殺性；使用流式細胞儀 (flow cytometry) 檢測 HDAC 抑制劑是否會影響細胞週期的分佈；利用 DNA 片斷化分析 (DNA ladder assay) 確認 HDAC 抑制劑是否誘導細胞凋亡 (cell apoptosis)；以細胞免疫染色的方式 (immunocytochemical analysis) 分析 HDAC 抑制劑使否會改變細胞骨架的結構；且利用反轉錄聚合酶鏈鎖反應 (RT-PCR) 與西方點墨法 (Western blot analysis) 分析 HDAC 抑制劑是否會影響肺癌細胞株各種目標基因其mRNA與蛋白質表達，或是影響蛋白質的乙醯化程度；接著，利用細胞質免疫沉澱 (Chromatin immunoprecipitation, ChIP)、細胞質免疫沉澱晶片分析(ChIP-on-chip)，大規模尋找 HDAC 抑制劑直接影響的新穎目標基因。結果：新穎的 HDAC 抑制劑可以有效的促使組織蛋白 H3 與 H4 與非組織蛋白 p53 的蛋白質乙醯化；此外其也可以有效誘導 p21WAF1/Cip1 與 Tissue inhibitor of metalloproteinase-3 (TIMP-3) 等基因的轉錄活化。新穎的 HDAC 抑制劑，HDAC-44 與 HTPB，可以有效的促使肺癌細胞株死亡 (HDAC 44對H1299的IC50為1.09 μM、HDAC 44對A549的IC50為0.64 μM、HDAC 44對CL1-1的IC50為0.67 μM、HTPB對H1299的IC50為2.99 μM、HTPB對A549的IC50為1.60 μM、HTPB對CL1-1的IC50為2.78 μM、SAHA對H1299的IC50為4.59 μM、SAHA對A549的IC50為1.89 μM、SAHA對CL1-1的IC50為2.86 μM)，但是對正常細胞株則沒有明顯的細胞毒殺性。將低劑量 HDAC-44 與 cisplatin 共同處理肺癌細胞株，發現對肺癌細胞有加成性的毒殺效果。HDAC-44 與 HTPB 可導致肺癌細胞株的細胞週期停在 G2/M 期並且導致細胞凋亡的現象，如：DNA ladder 與抗細胞凋亡的 Bcl2 蛋白質表達量下降。將肺癌細胞處理 HDAC-44 後，會導致細胞骨架蛋白 a-tubulin 的不正常分佈並且抑制癌細胞的細胞質分裂。ChIP-on-chip分析的結果顯示，HDAC抑制劑可以專一性的在三種測試癌細胞將一些 CpG island 乙醯化，這些 CpG island 所屬之基因可做為未來 HDAC 抑制劑的抗癌機制之目標基因群。結論： HDAC-44 與 HTPB 極具有潛力成為新穎的抗肺癌藥物，而HDAC抑制劑對其他種類的癌症影響也很值得做進一步的研究。Item 肺癌新穎抗癌藥物OSU03013之蛋白質體學研究及生長抑制之分子機制探討(2007) 李昆學; Kung-Hsueh Lee肺癌是國人最重要的癌症致死原因。肺癌病人通常在腫瘤切除後五年內死於癌症復發或腫瘤轉移，大部分接受化學治療的肺癌患者，常常因為對傳統化療藥物產生抗性而治療失敗，這些傳統化療藥物的副作用也對病人造成極大的痛苦，因此需要新藥的發展以提升肺癌患者的治癒率。近年來COX-2的抑制劑，celecoxib，它的結構修飾物OSU03013，在攝護腺、卵巢癌、乳癌等，已經被研究有抗癌的效果，並且是以AKT的訊息傳遞路徑來達到抑制攝護腺癌之生長。因此，本研究目標即是探討OSU03013在肺癌細胞之毒殺作用及其細胞學鑑定，之後利用二維電泳、質譜分析等蛋白質體學的方法找尋藥物的目標及影響蛋白，並分析這些蛋白/訊息傳遞路徑與細胞生長調控的關係。 在肺癌細胞株A549、CL1-1、H1435的IC50測試實驗中，本研究發現OSU03013具有高度細胞毒殺作用，而此藥物對於肺正常細胞並沒有此現象，所以我們認為它是一個治療肺癌很有潛力的藥物。在細胞學鑑定實驗中，我們發現OSU03013會造成細胞週期停滯在間期一 (Gap 1, G1 arrest) 的現象；OSU03013在肺癌細胞同時也藉由內質網壓力效應去引發細胞凋亡 (apoptosis)。在蛋白質體學的實驗中，我們發現此藥物在肺癌細胞之目標蛋白包含了cAMP-dependent protein kinase inhibitor β form (PKIB, 激酶抑制蛋白)、數種G proteins (G蛋白)、數種Heat-shock proteins (熱休克蛋白)、Antioxidant enzymes (去氧化蛋白)、及其他調控細胞生長、代謝的蛋白；這些蛋白有許多皆以Western blot (西方點墨法) 確認。由於OSU03013在肺癌細胞中因為PKIB的過度活化，我們預測其下游蛋白cAMP-dependent protein kinase (PKA) 的蛋白表現量在處理藥物後會下降，以抑制PKA的訊息傳導路徑，其中一條路徑抑制了Wnt/-catenin活性，所以抑制了肺癌細胞生長；而並非如同在攝護腺癌中，是透過AKT傳導路徑來抑制癌細胞的生長。本研究為首篇在肺癌細胞中偵測OSU03013藥物之抑制癌細胞潛力，及其抑癌分子機轉之研究。Item 肺癌偵測分子指標於痰液及血漿樣本之鑑定研究(2005) 陳司佩; Tsz-Pei Chen研究緣起：肺癌是國人癌症致死率的首位，也是全世界最普遍的惡性腫瘤之一，全世界每年有超過百萬人死於肺癌，據統計罹患肺癌後五年的存活機率約10~15%，依據患者手術當時的癌症分期而定，愈晚期治療，存活率愈低。傳統上針對長期抽煙的人採用胸部X光照影以及痰液細胞學檢驗來進行篩選的策略，已經證實無法有效早期偵測肺癌來降低肺癌的致死率。因此利用靈敏性較高的分子指標進行早期偵測是目前刻不容緩，也是提高肺癌患者存活率的重要工作。 研究目的：癌細胞的轉變是一連串分子變異累積形成的，這些變異發生在抑癌基因 (Tumor suppressor gene, TSG)、致癌基因 (Oncogene)、DNA修補基因，以及內在或外在環境因子造成的基因不穩定現象。已有少數研究顯示在肺癌病人痰液、氣管灌流液以及血清樣本中，可以偵測出癌症相關基因啟動子高度甲基化、基因座缺失及微衛星序列重複次數改變所得之基因體不穩定現象。本研究主要目的在於更進一步確認可在同一肺癌患者的痰液 (sputum) 樣本或血漿 (plasma) 樣本中偵測到與肺癌細胞一致的分子變異指標，進一步挑選出多個靈敏性與專一性較高的分子指標作為未來早期肺癌相關分子指標群 (Early detection biomarkers)。 研究方法：Part I，在79位肺癌病人的肺癌細胞及痰液 (sputum) 樣本中，利用methylation-specific PCR (MSP) 共檢查了三個基因 (FHIT, p16INK4a, and RARβ) 的啟動子高度甲基化 (promoter hypermethylation)，並且偵測了八個微衛星序列 (D3S1234, D3S1285, D5S1456, D9S286, D9S942, GATA49D12, D13S170, and D17S786) 的異質性缺失 (loss of heterozygosity, LOH) 及微衛星不穩定現象(microsatellite instability, MSI)。Part II，63位肺癌病人的肺癌組織及血漿 (plasma) 樣本中，利用MSP共檢查了六個基因 (BLU, CDH13, FHIT, p16INK4a, RARβ, and RASSF1A) 的啟動子高度甲基化。另外還有22位無肺癌個體的痰液及血漿樣本的偵測，分別作為肺癌病人的痰液及血漿分析的對照組。 研究結果：Part I痰液分析，本研究於肺癌細胞及痰液的分子指標偵測結果分別進行靈敏性 (sensitivity)、專一性 (specificity)、一致性 (concordance) 及危險比 (odds ratio, OR) 的分析，挑選出的合適指標包括D9S286、D9S942、GATA49D12、D13S170的 LOH，D9S942 MSI，以及p16INK4a、RARβ的甲基化分析共七個變異；其中，痰液樣本中發生D9S942 LOH的危險比為4.9 (95% confidence interval, CI: 1.23~21.73, P=0.024)，p16INK4a甲基化的危險比為3.29 (95% CI: 1.00~14.93, P=0.049)。七個合適指標偵測結果採取聯集判定，其預測的靈敏度為81%，專一性有72%，一致性為77%，未來將以此方式應用於早期肺癌的臨床檢驗。另外，利用training set (53位肺癌病人，13位無肺癌個體) 的偵測結果進行迴歸分析，再以test set (26位肺癌病人，9位無肺癌個體) 的偵測結果帶入迴歸方程式進行驗證，得到80 %的符合率，最後再以所有樣本 (79位肺癌病人，22位無肺癌個體) 的偵測結果得到樣本數較多的新迴歸方程式Y = -0.87＋0.79 (D9S286 LOH)＋1.96 (D9S942 LOH)＋2.24 (GATA49D12 LOH)＋12.19 (D13S170 LOH)＋11.02 (D9S942 MSI)＋0.70 (p16INK4a methyl)＋1.25 (RARβ methyl)。 Part II血漿分析，甲基化頻率較高的指標有p16INK4a、RARβ及RASSF1A，且血漿中p16INK4a甲基化的危險比為5.56 (95%CI: 1.41~37.22, P=0.012)，RASSF1A甲基化的危險比為5.48 (95%CI: 1.37~37.00, P=0.014)。以p16INK4a、RARβ以及RASSF1A三基因任一個甲基化的聯集判定，預測效果的靈敏度為74%，專一性有78%，一致性為75%。利用training set (43位肺癌病人，13位無肺癌個體) 的偵測結果進行迴歸分析，再以test set (20位肺癌病人，9位無肺癌個體) 進行驗證，得到83%的符合率，最後以所有樣本 (63位肺癌病人，22位無肺癌個體) 的偵測結果計算得到的新迴歸方程式如下Y = 0.19＋0.52 (BLU methyl)＋1.92 (p16INK4a methyl)＋1.52 (RASSF1A methyl)，預測的靈敏性有77%，專一性為90%，一致性有79%，未來將以此方式應用於早期肺癌的臨床檢驗。 結論：分析結果所挑選出來的肺癌相關分子指標群，未來將應用於臨床大量篩檢，檢查結果為異常的個案將持續追蹤，期待能夠早期發現，早期治療，降低國人的肺癌致死機率。