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    龜鹿二仙膠應用在緩解關節與骨骼退化的補充替代醫療潛力
    ( 2021) 林涵君 ; Lin, Han-Chun
    隨著超高齡社會的來臨,高齡長者行動不便以及長期臥病在床等問題,已經造成醫療資源與健保費用的龐大支出,為緩解長者骨質疏鬆症和退化性關節炎,民間常以龜鹿二仙膠補強筋骨。本論文主要研究龜鹿二仙膠對於緩解關節與骨骼退化的替代醫療效果,本研究選用與順天堂科學中藥廠提供的龜鹿二仙膠,龜鹿二仙膠主要藥材包括枸杞、龜板、人參和鹿角。本研究首先利用1,1-二苯基-2-吡啶並肼基(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl;DPPH)自由基清除能力測試檢視龜鹿二仙膠的抗氧化力;再利用脂多醣(lipopolysaccharide,LPS)處理關節滑膜細胞(HIG-82),藉此誘發關節滑膜細胞(synoviocyte,HIG-82)的發炎現象,透過細胞存活率分析法(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide;MTT assay)以及酵素結合免疫吸附分析法(Enzyme-linked immunosorbent;ELISA assay),檢視龜鹿二仙膠是否可以緩解脂多醣(LPS)誘發關節滑膜細胞(HIG-82)的發炎;此外,本研究利用化療藥物阿黴素預先處理,藉此誘發老化小鼠的骨骼疏鬆,然後使用骨骼電腦斷層掃描技術檢視脛骨的骨小樑與骨密度,藉此評估龜鹿二仙膠是否可以緩解化療藥物阿黴素所誘發小鼠的骨質疏鬆。本論文結果顯示龜鹿二仙膠不但可以顯著增強DPPH自由基清除能力,對於脂多醣(LPS)誘發關節滑膜細胞(HIG-82)的發炎,也有顯著的緩解效果;此外,對於化療藥物阿黴素(doxorubicin,DOX)所誘發小鼠的骨質疏鬆,連續餵食龜鹿二仙膠四週後,也有顯著的緩解效果。歸納本研究結果,可以說明龜鹿二仙膠對於緩解關節與骨骼退化確實具有替代醫療效果。研究者認為適時給予中、高齡長者補充龜鹿二仙膠,將有助於緩解高齡長者行動不便以及長期臥病在床等問題,大大降低醫療資源與健保經費的龐大支出。
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    應用果蠅模式篩選中草藥抑肝散(順寧意)緩解阿茲海默氏症的醫療潛力
    ( 2021) 鄭詠馨 ; Jheng, Yong-Sin
    傳統中藥抑肝散過去常用於治療神經退行性疾病、精神官能症、失眠。而阿茲海默氏症是失智症裡各類型中最常見的,主要是以澱粉樣蛋白β (Aβ) 的異常堆積和Tau蛋白的過度磷酸化造成腦部細胞損傷有關。本文利用DPPH檢測中藥抑肝散的自由基清除與抗氧化能力;再透過細胞存活率分析法(MTT assay)檢視中藥抑肝散對於SH-SY5Y神經細胞的保護作用,實驗結果顯示中藥抑肝散具有相當高的自由基清除與抗氧化能力,對於SH-SY5Y神經細胞也有顯著的保護作用。本文利用轉基因果蠅表現Aβ42和hTauR406W毒性蛋白質作為AD動物模式,研究中藥抑肝散對人類Aβ 和人類Tau蛋白過度累積所引發的神經毒性在果蠅上是否具有保護作用。由於人類Aβ蛋白過度表現的Aβ42 會產生複眼退化;因此利用綠螢光蛋白觀察Aβ42 表現所造成的複眼退化,以及計算hTauR406W的背甲剛毛數目,可以評估中藥抑肝散對於Aβ和Tau蛋白過度表現果蠅的神經保護作用,實驗結果顯示中藥抑肝散可以緩解Aβ42 複眼的退化;另外也可以顯著緩解hTauR406W果蠅的背甲剛毛退化。此外,透過高靈敏的免疫磁減量(ImmunoMagnetic Reduction,IMR)技術可以評估Aβ42的Aβ蛋白表現,以及評估hTauR406W的Tau蛋白表現,結果顯示中藥抑肝散可以降低Aβ蛋白以及Tau蛋白的表現。歸納研究結果,可以說明中藥抑肝散對於緩解阿茲海默氏症可能具有替代醫療效果。
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    海洋深層水通過IGF1R的表現強化間葉幹細胞的能力以調節microRNA-880-3p治療老化所造成的心臟疾病
    ( 2021) 武柏寬 ; Wu, Po-Kuan
    衰老是降低心臟功能的原因之一,幹細胞療法可能為治療由衰老引起的心臟功能障礙提供更光明的未來。海洋深層水(DSW)顯示出對細胞保護的有益作用,但細胞機制仍不清楚。這項研究旨在研究用海洋深層水(DSW)預處理的間葉幹細胞是否比未經海洋深層水(DSW)預處理的間葉幹細胞具有更好的心臟保護作用。在細胞研究中,我們發現深海水通過膜蛋白胰島素樣生長因子1受體(IGF1R)的表達提高幹細胞活力。此外,我們證實miR-880-3p在老年心肌細胞中表現量增加。在與幹細胞共培養的老年心肌細胞中,我們發現海洋深層水(DSW)預處理的幹細胞顯著降低了老年心肌細胞中衰老的miR-880-3p的表現,從而導致了心肌細胞功能的恢復。在動物研究中,在治療老年的大鼠心臟中,我們發現海洋深層水(DSW)預處理的幹細胞顯著降低了老年心臟中老化的蛋白表現與纖維化表現,從而導致了心臟功能的恢復。此外,我們也證實海洋深層水(DSW)預處理的幹細胞能夠修復心臟中細胞雜亂的排列與細胞數量。
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    利用幹細胞分泌體調節粒線體動態失衡所造成的巨噬細胞極化藉以改善痛風
    ( 2021) 郭承樺 ; Kuo, Cheng-Hua
    痛風性關節炎是由單鈉尿酸鹽結晶(monosodium urate crystals, MSU)的堆積所造成的,而巨噬細胞在急性痛風性關節炎中扮演很重要的角色。活化的巨噬細胞通常被分成兩大類:典型活化巨噬細胞(classically activated macrophages, M1)與另類活化巨噬細胞(alternatively activated macrophages, M2),而他們分別具有促發炎與抗發炎的功效。粒線體動態被視為維持正常細胞功能的一個機制,在先前的研究中,幹細胞能旁分泌(paracrine)出生長因子等進而影響周圍的細胞。將這些幹細胞旁分泌出來的分泌體(secretome)收集成條件培養基(conditioned medium)做後續實驗,而為了能使幹細胞條件培養基(stem cell conditioned medium, SCM)能更加有效,會將幹細胞預先培養在含有發炎因子的環境中數小時,使其提早適應病理環境藉以強化他,並收集強化幹細胞條件培養基(strengthened stem cell conditioned medium, SSCM)。高尿酸血症所引起的痛風性關節炎由於發作時只能利用一些化學藥物來消炎止痛,而且這些藥物會導致胃腸道與腎臟的毒性,所以本研究想利用幹細胞的分泌體來進行治療。在細胞實驗中,我們利用不同濃度的MSU結晶刺激巨噬細胞,結果顯示巨噬細胞的ROS含量、發炎現象隨著結晶濃度的增加而隨之增加,粒線體動態則是隨著結晶濃度的增加而愈趨向融合(fusion)。在經過發炎環境的預處理後,幹細胞CXCR4的蛋白質表現量上升,證實能透過這條路徑強化幹細胞,且強化幹細胞conditioned medium能使發炎現象下降並改善粒線體動態的不平衡,也能夠使M1巨噬細胞的數量下降。在動物實驗中,強化幹細胞conditioned medium能夠使關節中細胞浸潤的現象降低,並能夠使軟骨組織的排列較為緊密且量多,而粒線體動態也有改善的現象。因此強化幹細胞conditioned medium對於痛風有改善的潛力。
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    養肝丸(神立清)之抗氧化及肝臟保護藥效評估
    ( 2021) 葉佳文 ; Yeh, Chia-Wen
    中文摘要 在臺灣,民眾罹患肝病盛行率居高不下,而肝病造成之死亡率,多年來亦高居十大死因之前幾位,因此開發有效保護肝臟功能的藥物,一直是生技醫藥產業積極投注資金及研發的重點項目。過去西方醫學對於肝病的治療多採取支持性的保守療法,對於具體促進肝功能的西藥開發進程更是緩慢。從中醫學古籍中草藥相關之記載中,對於保護肝臟的中藥方已有相當清楚的認識,惟肝病中醫藥雖然源遠流長數千年,但由於西方科學盛起之故,未經科學研究證實功效的中醫藥反而屢受質疑。為此,本論文主要研發具保護肝臟功能的傳統中藥,以科學實驗的研究證實相關藥物功效。本研究選用順天堂中藥養肝丸(神立清)顆粒劑探討其抗氧化及肝臟保護的藥效。利用清除DPPH自由基能力測定實驗,本實驗研究結果發現養肝丸(神立清)顆粒劑具備顯著的清除DPPH自由基能力;利用活體外細胞實驗,結果發現養肝丸(神立清)顆粒劑可以緩解因革蘭陰性菌外膜成分脂多糖(LPS)誘發肝臟細胞的損傷。此外,利用動物餵食實驗,結果發現養肝丸(神立清)顆粒劑可以保護小鼠對乙醯胺酚(APAP)誘發的肝毒性。綜觀順天堂中藥養肝丸(神立清)顆粒劑,效能確實並具有抗氧化的功效,再者目前經由科學學理實驗研究證實養肝丸(神立清)顆粒劑確實具有保護肝臟機能功效,因此應該可以作為保肝的中藥。