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傳統中藥樟芝萃取物對棕櫚酸處理血管內皮細胞脂質累積的緩解作用
(2023) 陳韋羽; Chen, Wei-Yu
高脂血症是動脈粥樣硬化最主要的危險因素，過程涉及動脈粥樣硬化患者在早期時脂質於動脈內膜中的累積，而形成動脈粥樣硬化的過程中，血管內皮細胞、巨噬細胞的氧化壓力、細胞凋亡、CD36以及Kruppel-like factor 4(KLF4)蛋白質的表現均扮演重要角色。本研究嘗試探討牛樟芝萃取物對於動脈粥樣硬化的調節潛力，使用棕櫚酸(Palmitic acid)處理血管內皮細胞SVEC4-10與RAW264.7巨噬細胞作為高脂累積細胞模式，藉由胞外實驗(in vitro)評估牛樟芝萃取物對於高脂累積的緩解作用。本研究採用由牛樟芝萃取出的化合物，利用HPLC確定牛樟芝萃取物的化學指標活性成份，並用DPPH測定牛樟芝萃取物的自由基清除能力，再以油紅O染色法(Oil Red O Stain)檢視牛樟芝萃取物可否有效降低高脂累積內皮細胞SVEC4-10的油滴脂質累積，以酵素結合免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 檢測牛樟芝萃取物可否有效降低炎性細胞因子TNF-α (tumor necrosis factor-α)、IL-1β(interleukin-1β)的表現量；利用細胞免疫螢光染色方法檢測牛樟芝萃取物是否有效降低CD36蛋白質表現以及增強KLF4蛋白質表現；利用遷移試驗(transwell migration assay)檢測牛樟芝萃取物是否增加RAW264.7巨噬細胞的移動能力來清除血管內皮細胞的脂質累積。本實驗結果顯示：此牛樟芝萃取物具備很好的自由基清除能力，可以顯著降低血管內皮細胞的油滴脂質累積，減少TNF-α、IL-1β以及CD36的表現量，但是增強KLF4蛋白質表現。此外，牛樟芝萃取物可以促進RAW264.7巨噬細胞的遷移能力。綜合上述結果，我們認為牛樟芝萃取物可以透過減少血管內皮細胞的油脂累積，抑制巨噬細胞的氧化壓力與細胞凋亡，來達到緩解高脂累積，以及調節動脈粥樣硬化的潛力。
山苦瓜對apoE剔除小鼠動脈硬化的影響
(2006) 詹鳳紋; Fong-Wun Jhan
動脈硬化是一種發展緩慢且複雜的發炎疾病，由前人研究發現山苦瓜可能有抗發炎效果，因此本研究探討山苦瓜凍乾粉末和山苦瓜乙酸乙酯萃取物對於apoE剔除小鼠發炎與動脈硬化的影響。實驗一將18週大雄C57BL/6J apoE剔除小鼠分為6組，分別餵予一般商業飼料(n=5)、20％高脂飼料(n=10)、20％高脂飼料含5％山苦瓜凍乾粉末(n=10)、或含1％山苦瓜乙酸乙酯萃取物(n=10)、或含0.5％clofibrate(n=5)、或含0.00123％Thiazolidinedione (n=5)，餵食18週，犧牲後收集心血管、血液，分析血清黏著分子、發炎因子，並將主動脈封蠟包埋橫切分析內皮增厚程度，結果顯示山苦瓜凍乾粉末和山苦瓜乙酸乙酯萃取物對血清黏著分子、發炎因子並無顯著影響，但胸主動脈內皮增厚程度以餵食山苦瓜乙酸乙酯萃取物組顯著低於高脂組，新生內層與中層面積比率低了57% (p<0.05)，顯示山苦瓜乙酸乙酯萃取物可能具有改善動脈硬化的效果。實驗二改用較年輕的小鼠，且主動脈改用縱切觀察脂肪堆積情形，將6-10週大雄C57BL/6J apoE剔除小鼠分為3組分別餵予20％高脂飼料(n=11)、20％高脂飼料含5％山苦瓜凍乾粉末(n=11)、或含1％山苦瓜乙酸乙酯萃取物(n=11)，餵食8週，犧牲前一週分析白血球黏著分子Mac-1(CD11b/CD18)，犧牲後收集主動脈血管、血液，分析血清發炎因子、8-iso-Prostaglandin F2α和主動脈縱切脂肪堆積，結果顯示山苦瓜凍乾粉末和山苦瓜乙酸乙酯萃取物對血清發炎因子、白血球Mac-1、8-iso-PGF2α並無顯著影響，但山苦瓜乙酸乙酯萃取物組在主動脈縱切脂肪堆積顯著比高脂組低了28％(p<0.05)，再次證明山苦瓜乙酸乙酯萃取物具有改善動脈硬化的效果。
探討芝麻素對腫瘤壞死因子刺激人類主動脈內皮細胞表現細胞黏附分子的影響及相關機轉
(2007) 高雅詩; Ya-shi Kao
在動脈硬化發生早期，血流中白血球的黏附和遷移入血管壁為主要因素，而內皮細胞所分泌的細胞黏附分子，則在動脈硬化過程中扮演了重要的角色。抗氧化物可以抑制細胞黏附分子的表現，並且可以降低動脈硬化發生的機會。本實驗中，主要探討以芝麻木質素sesamol與sesamin處理人類主動脈內皮細胞（HAECs）表現細胞黏附分子的影響及相關機制。以sesamol (100 μM)或sesamin (100 μM)預先處理HAEC 24小時，可以顯著的抑制U937細胞黏附於內皮細胞。以西方墨點法得知處理sesamol或是sesamin可以抑制TNF-α刺激細胞黏附分子ICAM-1的表現。觀察MAPK主要途徑ERK1/2、JNK及p38的磷酸化，發現sesamin可以抑制ERK1/2與p38的磷酸化。此外，NF-κB p65免疫染色及凝膠遲滯分析結果顯示，sesamol及sesamin均可降低NF-κB的活性。實驗結果證實，sesamin可以藉由抑制ERK1/2 與 P38的磷酸化及降低NF-κB活性，減少細胞受TNF-α刺激所引發的ICAM-1表現。由上述結果得知：芝麻木質素可藉由拮抗內皮細胞失調及發炎反應，達到保護心血管的功能。
數種天然食材對ApoE剔除鼠代謝症候群與動脈硬化的影響
(2010) 顏妙容; Miao-Jung Yen
女性停經後因雌激素缺乏，代謝症候群與心血管疾病風險激增，已知苜蓿芽乙酸乙酯與茉莉甲醇萃物含植物性雌激素，本研究探討此兩種萃物對卵巢摘除之ApoE剔除母鼠代謝症候群與動脈粥狀硬化的影響。苦瓜乙酸乙酯萃物含PPAR活化劑，本實驗室過去發現苦瓜乙酸乙酯萃物可降低ApoE剔除公鼠的動脈粥狀硬化，本研究進一步探討此萃物對頭臂動脈斑塊穩定度與代謝症候群的影響。實驗一、8~12週齡ApoE剔除母鼠，接受卵巢摘除或假手術後，依年齡及體重分為四組，假手術組 (Sham, n=9) 與去卵巢組 (OVX, n=12) 餵予高脂飼料(20%fat)；去卵巢苜蓿組 (OVX+A, n=12) 與去卵巢茉莉組 (OVX+J, n=11) 分別給予添加1%苜蓿芽乙酸乙酯萃物或茉莉甲醇萃物的高脂飼料，15週後犧牲。結果OVX+A組體重及心臟重量顯著低於OVX組 ( p<0.05)，腎臟重量顯著低於其他三組 ( p<0.05)；OVX+J組子宮周脂和肝臟重量顯著低於OVX組 ( p<0.05)；血液TG、FFA、glucose、insulin、adiponectin、leptin各組間無顯著差異，但OVX+A組於第8週時TC濃度低於OVX組 (p=0.061)，於第15週時顯著低於Sham組 ( p<0.05)。OVX+A組肝臟膽固醇濃度顯著低於OVX+J組及OVX組；OVX+A組及OVX+J組肝臟TG濃度顯著低於OVX組 ( p<0.05)，與肝切片脂質染色結果一致。OVX+A組及OVX+J組脂肪細胞體積顯著比OVX組小 ( p<0.05)。OVX+A組主動脈縱切脂肪堆積較其他組輕，但無顯著差異；頭臂動脈橫切新生內層及中層面積比值(I/M, intima/media ratio) OVX+A組略有降低趨勢 (p=0.063)，且下降頭臂動脈病灶處MMP-9及IL-1之免疫染色，增加TM之染色。胸主動脈促發炎因子蛋白質MMP-9及IL-1表現量則是各組無顯著差異。實驗二、19週齡ApoE剔除公鼠依年齡及體重分為兩組，餵予高脂飼料 (20%fat) (HF, n=8)，或高脂飼料加1%山苦瓜乙酸乙酯萃物 (HF+BEA, n=9)，12週後犧牲。結果兩組間體重、組織重量及血液生化值、頭臂動脈I/M ratio皆無顯著差異。頭臂動脈免疫染色分析顯示HF+BEA組不能降低MMP-9、IL-1β表現，但可顯著增加保護因子TM及HO-1的表現。胸主動脈發炎因子IL-1β蛋白質表現量中，HF+BEA組顯著減少。總結：於卵巢摘除之ApoE剔除母鼠，苜蓿芽乙酸乙酯萃物可顯著改善體重、腹腔脂肪細胞體積、血膽固醇、肝膽固醇及脂肪濃度，使頭臂動脈病灶處MMP-9及IL-1表現下降、TM表現增加，可能具改善代謝症候群與增進動脈硬化斑塊穩定度之效用；茉莉甲醇萃物可顯著改善腹腔與肝臟脂肪堆積，脂肪細胞體積大小。苦瓜乙酸乙酯萃物於ApoE剔除公鼠中，可增加頭臂動脈TM及HO-1的表現，下降胸主動脈IL-1β表現，對動脈硬化可能有改善效果。
數種植物性雌激素對動脈粥狀硬化相關因子之影響
(2008) 沈靈; Ling Shen
動脈粥狀硬化是很複雜的血管病變，好發於冠狀動脈。從早期血管腔的內皮層下方出現脂肪條堆積，到出現動脈硬化斑塊等複雜病灶過程需數十年，導致心血管疾病的發生。許多臨床研究指出大豆異黃酮對心血管具有保護作用，且可能與雌激素活性有關。本研究探討多種含植物性雌激素活性食材之萃物 (苜蓿芽、山藥乙酸乙酯萃物，茉莉、菊花甲醇萃物) 或純化合物 (enterolactone，sesamin，genistein) 是否能抑制： (1) 已分化的THP-1細胞在氧化型低密度脂蛋白刺激下，促發炎介質（IL-1β、TNF-α、MCP-1）與基質金屬蛋白酶MMP-9的mRNA表現及蛋白質分泌量 (2) 已分化的THP-1細胞在氧化型低密度脂蛋白刺激下，攝入膽固醇的程度以及其CD36與ABC A1 mRNA表現量。(3) 內皮細胞在氧化型低密度脂蛋白刺激後，與THP-1 細胞黏附的程度。實驗設計：(1) 將THP-1細胞以PMA誘導細胞完全分化後，加入食材萃物或純化合物，先培養兩小時後，再給予氧化型低密度脂蛋白處理細胞共同培養24或48小時，收集上清液以ELISA分析IL-1β、TNF-α、MCP-1與MMP-9的含量，並且經過共同培養16或48小時，收集細胞以分析IL-1β、TNF-α及MMP-9之mRNA表現。(2) 將已分化THP-1細胞加入食材萃物或純化合物，先培養兩小時後，再給予氧化型低密度脂蛋白處理細胞共同培養16或48小時，收集細胞以分析其總膽固醇含量及CD36與ABCA1之mRNA表現。(3) 將內皮細胞 (HAECs) 加入各種食材萃物或化學物與氧化型低密度脂蛋白共同處理24小時，再加入已染有螢光的THP-1 細胞共同培養後，分析細胞黏附的程度。結果發現：(1)所有測試物皆顯著下降IL-1β的濃度；除了enterolactone外，所有測試物皆顯著下降TNF-α濃度；enterolactone，sesamin，genistein及苜蓿芽乙酸乙酯萃物顯著下降MCP-1濃度；enterolactone，genistein，苜蓿芽乙酸乙酯萃物及山藥乙酸乙酯萃物能顯著下降MMP-9濃度與活性。(2) enterolactone、sesamin、茉莉甲醇萃物和菊花甲醇萃物能顯著下降細胞內總膽固醇濃度，且茉莉和菊花甲醇萃物能顯著下降CD36 mRNA表現。 (3)所有測試物皆可顯著降低內皮細胞與單核球THP-1黏附的程度，其中sesamin、苜蓿芽乙酸乙酯萃物及菊花甲醇萃物還能顯著下降MCP-1濃度。根據以上結果推測，茉莉與菊花甲醇萃物可能經由抑制CD36表現，降低巨噬細胞內總膽固醇量，而具有抑制泡沫細胞生成之潛力。所有測試物除了enterolactone外，皆可顯著下降IL-1β及TNF-α濃度，可能具抗發炎之效用。Enterolactone、genistein及苜蓿芽乙酸乙酯萃物皆能顯著抑制MCP-1與MMP-9濃度及MMP-9活性，推測他們可能具有減少單核球聚集、下降單核球與內皮細胞黏附的程度、減少平滑肌細胞移行，及減緩斑塊破裂的可能潛力。總結以上發現，enterolactone、genistein、山藥乙酸乙酯萃物與苜蓿芽乙酸乙酯萃物皆可能經由抑制初期的細胞黏附，抑制促發炎介質分泌，並增加後期的斑塊穩定性，具有減緩動脈粥狀硬化之潛力。
海洋深層水有機萃取物對高血脂倉鼠之降血脂效果
(2019) 伍佳錞; Wu, Chia-Chun
　　高血脂(Hyperlipidemia)為造成肝臟及心血管疾病的危險因子，如非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)與動脈硬化(Atherosclerosis)。高血脂起因於代謝性疾病或不均衡的飲食習慣。海洋深層水(Deep sea water, DSW)含有豐富的營養素，並具有抗氧化與抗發炎等特性。目前為止已有許多研究證明能預防或改善疾病。本篇研究欲探討飲用海洋深層水有機萃取物質調整血脂肪之成效。　　實驗設計分為一般飼料控制組、高脂飼料高血脂誘發組，以及高脂飼料搭配高低劑量海洋深層水有機萃取物治療組，一共四個組別。高脂肪飲食引發高血脂、非酒精性脂肪肝與初期動脈硬化。飲用海洋深層水有機萃取物質有效抑制血脂上升，減少脂肪於肝臟累積並降低細胞凋亡蛋白表現。低密度脂蛋白氧化堆積於血管內皮易導致動脈硬化。海洋深層水有機萃取物質為一卓越的抗氧化劑，使血液中的自由基與脂質氧化物顯著降低。此外，海洋深層水有機萃取物質抑制細胞黏附因子於動脈內皮表現，降低血管阻塞風險。　　透過有機萃取物所具備的抗氧化力與降低血脂的能力，能有效預防高血脂、肝臟與心血管疾病。