學位論文
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Item 植物萃取物對痤瘡致病菌之生長、菌膜形成與脂解酶活性的抑制作用(2011) 嶺瑤蓉; Yau Rong Liing尋常性痤瘡(acne vulgaris)，是一種常見的皮膚疾病。痤瘡桿菌(Propionibacterium acnes)和表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)存在於人類皮膚含皮脂腺的毛囊(pilosebaceous follicle)，在尋常性痤瘡的致病過程中扮演著重要角色。這些痤瘡致病菌(acne-causing bacteria)會形成菌膜(biofilm)抵抗外在不良的環境條件，也是產生抗藥性的因子之ㄧ，另外其所分泌的胞外脂解酶，水解皮脂中三酸甘油酯供給菌體所需養份，同時誘發後續的發炎反應。P. acnes感染角質細胞時，會刺激細胞產生超氧陰離子(superoxide anions)，雖抑制P. acnes生長但會引發角質細胞分解，誘導發炎反應。 我們篩選34種市售植物乙醇萃取物的抗菌活性，結果發現迷迭香(Rosmarinus officinalis )、鼠尾草(Salvia officinalis L. )、紅茶、綠茶(Camellia sinensis )及馬鞭草(Verbena officinalis Linn)可有效抑制P. acnes生長。所以在後續實驗，我們製備了上述五種植物的乙醇、甲醇、乙酸乙酯(ethyl acetate)及水萃取物作為試驗材料，分別評估其抗菌能力以及對P. acnes菌膜(biofilm)，脂解酶活性(lipase activity)和對活性氧屬的抑制效果。最後，使用HPLC分析迷迭香萃取物之有效成份並加以定量。 本研究結果發現，在乙醇萃取物中，抑制P. acnes生長效果最好的是紅茶及綠茶，而抑制S. epidermidis生長效果最好的則是馬鞭草。在甲醇萃取物中，抑制P. acnes生長效果最好的是紅茶及綠茶，而抑制S. epidermidis生長效果最好的則為迷迭香萃取物。在乙酸乙脂萃取物中，抑制P. acnes生長效果最好的是紅茶及綠茶，而抑制S. epidermidis生長效果最好的則為迷迭香。在水萃取物中，抑制P. acnes和S. epidermidis生長效果最好的皆為紅茶及綠茶，迷迭香於本實驗的條件下，不具有抑菌的效果，馬鞭草萃取物不具有抑制S. epidermidis生長的效果。 植物萃取物對P. acnes菌膜形成(biofilm formation)之影響的實驗結果，在菌膜生成過程中，觀察植物萃取物於培養第16 hr和48 hr時對於菌膜biomass的影響，這兩個時間點分別用來代表萃取物抑制菌膜形成(prevention of biofilm formation；簡寫為PBF)和移除菌膜的能力(removal of established biofilm；簡寫為REB)。結果發現，迷迭香、鼠尾草、紅茶、綠茶及馬鞭草的乙醇、甲醇、EA及水萃取物具有PBF之能力，而鼠尾草和綠茶的乙醇、甲醇及水萃取物具REB之效果。 植物萃取物抑制P. acnes及S. epidermidis脂解酶活性的實驗結果中，馬鞭草、迷迭香、鼠尾草、綠茶以及紅茶萃取物皆顯著抑制脂解酶活性。植物萃取物清除自由基之能力的實驗結果中，(a)清除DPPH及一氧化氮自由基能力：綠茶及紅茶萃取物清除DPPH及一氧化氮自由基能力最好，迷迭香及馬鞭草萃取物次之，鼠尾草萃取物最差。(b)清除超氧陰離子自由基能力：綠茶及紅茶萃取物清除超氧陰離子自由基能力最好，迷迭香及鼠尾草萃取物次之，馬鞭草萃取物最差。(c)清除羥基自由基能力：綠茶及紅茶萃取物清除羥基自由基能力最好，鼠尾草及馬鞭草萃取物次之，迷迭香萃取物最差。(d)總多酚含量：綠茶及紅茶萃取物總酚含量最高，馬鞭草萃取物次之，迷迭香及鼠尾草萃取物最少。HPLC分析迷迭香萃取物之有效成份的實驗結果中，除了迷迭香水萃物外，迷迭香乙醇、甲醇及EA萃取物皆含有迷迭香、鼠尾草酚及鼠尾草酸等有效成份，並且含量皆是迷迭香甲醇萃取物最高、乙醇萃取物次之，EA萃取物含量最少。 綜合上述結果，迷迭香、鼠尾草、紅茶、綠茶及馬鞭草萃取物均具有抑制痤瘡致病菌生長、菌膜形成及脂解酶活性之能力，並且具有優異的抗氧化能力，故以上五種植物萃取物具有治療痤瘡及抗氧化的潛力。未來在臨床上可應用於預防或是緩解痤瘡，也能減少使用抗生素所產生之抗藥性。Item 探討香料萃取物抑制痤瘡桿菌生長與抗發炎之作用與機轉(2010) 連聰蓉; Tsung-Jung Lien尋常性痤瘡(acne vulgaris)俗稱青春痘是一個非常常見的皮膚疾病，好發年紀除了青春期的青少年外，在成年人也常見。痤瘡的致病機轉牽涉到非常多的因素，包括不正常的過度角質化、皮脂分泌增加、荷爾蒙、免疫反應、皮膚內微生物特別是痤瘡桿菌。常見的治療方式是使用抗生素，但是現行資料顯示人體皮膚內的痤瘡桿菌對於常用抗生素有越來越多抗藥性的情形出現，因此開發非抗生素類的治療藥物是一個漸受重視的議題。本研究的目的為篩選出具有抗菌作用能夠抑制痤瘡桿菌(Propionibacterium acnes)的生長，或具有抗發炎作用的天然食材能夠抑制由P. acnes 所誘發的發炎反應以緩解尋常性痤瘡。 首先進行預實驗，以抗菌能力作為篩選標的，得知4種香料(culinary spices)的乙醇萃取物具有抑制痤瘡桿菌生長的作用。這4種香料為迷迭香、百里香、丁香和奧勒岡，其最低抑菌濃度(MIC)分別為4 , 8, 8, 16 mg/mL。接著進行本研究， 將這4種香料以不同溶劑(乙醇、乙酸乙酯、水)萃取，分析項目有(1)抑制P. acnes與表皮葡萄球菌(S. epidermidis)生長的能力，(2)抗發炎活性：抑制P. acnes刺激單核球細胞THP-1細胞產生促發炎細胞激素的能力，(3)探討其抗發炎作用的可能機制。 本研究結果發現，在乙醇萃取物中，抑制P. acnes 和S. epidermidis生長效果最好的是迷迭香，百里香與奧勒岡次之，丁香最差；乙酸乙酯萃取物抑制P. acnes生長的效果以奧勒岡最好，抑制S. epidermidis生長的效果以迷迭香效果最好，而丁香乙酸乙酯萃取物於本實驗條件下，對於兩株菌皆無抗菌的效果；在水萃取物的部份，抑制P. acnes和S. epidermidis生長的效果以丁香效果最好，迷迭香和百里香於本實驗的條件下，不具有抑菌的效果。在抗發炎活性方面，以不影響細胞存活率的萃取物濃度與THP-1細胞共培養，發現迷迭香、丁香與奧勒岡的乙醇萃取物均能夠抑制P. acnes刺激THP-1細胞產生促發炎細胞激素 (TNF-α, IL-8 and IL-1β)的分泌與mRNA基因表現量。然而這些香料的乙酸乙酯與水萃取物卻有促發炎的現象。由於已知P. acnes活化toll-like receptor 2(TLR2)以及下游的訊息傳遞路徑，活化轉錄因子NFκB，進而調控促發炎細胞激素的表現。所以我們進一步探討其抗發炎機制是否經由TLR2和NFκB路徑。結果發現P. acnes顯著的誘導THP-1細胞的NFκB活化情形以及TLR2的mRNA表現，而這些活化路徑均能被迷迭香、丁香與奧勒岡乙醇萃取物所抑制。所以綜合上述實驗結果，我們推測這3種香料乙醇萃取物的抗發炎機制是能透過減弱單核球細胞膜上的TLR2的表現以及轉錄因子NFκB的活化，進而降低促發炎細胞激素的分泌與基因表現。 綜合而論，迷迭香、丁香與奧勒岡的乙醇萃取物具有抑制痤瘡致病菌的生長以及所引起的發炎反應，推測迷迭香、丁香與奧勒岡的乙醇萃取物含有活性成分，因而具有緩解痤瘡發炎之功效。