學位論文
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Item 以重組酶聚合酶擴增(RPA)新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)之定性與定量感測晶片技術開發(2022) 王映皓; Wang, Ying-Hao從2019年，由嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)引起2019新型冠狀病毒疾病(Coronavirus Disease 2019, COVID-19)已迅速傳播至全球，各國急需要高效、快速、具特異性和低價的診斷方法，以早期檢測到受感染的人，對抗SARS-CoV-2。其中，逆轉錄聚合酶鏈反應(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)是標準常用和準確度較高的方法檢測SARS-CoV-2，但缺點是檢測耗時、需要昂貴的設備與專業人員在生物安全第二等級(biosafety level-2, BSL-2)實驗室操作。本研究利用具有快速、高效、高靈敏的重組酶聚合酶擴增法(recombinase polymerase amplification, RPA)來檢測SARS-CoV-2高度保守N基因序列，並且結合規律間隔重複短迴文序列簇(clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR)的Cas12a酶做專一性檢測，以減少恆溫擴增的假陽性結果。透過開發RPA-CRISPR/Cas12a方法以檢測 SARS-CoV-2，使用側向流分析(lateral flow assay, LFA)和螢光強度(fluorescence intensity, FI)做定性分析。此外，定量RPA的方法較少，本研究使用表面電漿子共振(surface plasmon resonance, SPR)和電化學阻抗譜(electrochemical impedance spectroscopy, EIS)做SARS-CoV-2的 RPA 定量分析與專一性檢測，檢測極限(limit of detection, LOD)為每微升(μL) 1個SARS-CoV-2的去氧核醣核酸(deoxyribonucleic acid, DNA)拷貝數。本研究開發定性與定量專一性檢測SARS-CoV-2方法，具有快速和準確高的特性，可作為COVID-19早期診斷的有力工具。