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    Lunasin對C2C12肌小管細胞其發炎反應與葡萄糖利用之探討
    (2021) 黃靖雅; Huang, Ching-Ya
    摘要 肥胖為罹患心血管疾病、癌症、胰島素阻抗及第二型糖尿病的主要危險因子，並在近年來快速增加成為全球的流行病。肥胖會導致體內脂肪激素及游離脂肪酸異常增加，而脂肪激素、游離脂肪酸與及其代謝衍生物會干擾胰島素作用，進而造成胰島素阻抗。種子胜肽lunasin具有抗癌、抗發炎、抗氧化、調節膽固醇以及調節免疫功能等生理功能。本研究目的為探討lunasin處理對肥胖模式下C2C12小鼠肌小管細胞發炎反應和葡萄糖利用之影響。實驗中，將C2C12小鼠肌小管細胞以棕櫚酸 (palmitic acid, PA) 或adipocyte conditioned medium (Ad-CM) 刺激，引發胰島素阻抗以及模擬肥胖微環境，再給予lunasin處理。結果顯示，lunasin的介入不影響C2C12小鼠肌小管細胞存活率，於發炎模式中，lunasin處理能夠顯著降低自然狀態下能單核細胞趨化蛋白-1 (monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1；CCL2) 基因表現；在PA誘導的胰島素阻抗模式中，顯著降低腫瘤壞死因子-α (tumor necrosis factor α, TNF-α) 基因表現，及MCP-1和介白素-6 (interleukin-6, IL-6) 的分泌量。在氧化壓力及細胞活性方面，lunasin的介入能夠降低胰島素阻抗及肥胖模式下所刺激產生的活性氧 (reactive oxygen species, ROS)，並增加健康細胞比例。於葡萄糖代謝方面，進行了免疫螢光染色、葡萄糖攝入及測量培養基中葡萄糖量來表示胰島素敏感性，實驗結果發現lunasin的介入能夠增加葡萄糖轉運蛋白4 (glucose transporter-4, GLUT4) 之蛋白表現、改善葡萄糖攝入與胰島素敏感性，並顯著增加在PA誘導的胰島素阻抗模式中的肝醣貯存量。綜合上述，lunasin可能減緩肥胖模式下肌肉細胞發炎反應及調節葡萄糖利用，進而改善胰島素阻抗。目前對於lunasin在肥胖模式下藉由何種途徑調控發炎及葡萄糖代謝還尚未清楚，值得更進一步的探討。
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    以巨噬細胞株為模式探討苦瓜中影響前列腺素E2合成之區分物
    (2004) 林弼玉
    發炎反應與多種疾病的病程進展及組織損傷密切相關，抗發炎作用的相關因 此具有相當的重要性，也受到學界之重視。已知發炎過程中，涉及巨噬細胞的活 化，誘發COX-2 表現，主導PGE2的合成。PGE2為巨噬細胞主要產生的前列腺素， 為一重要促發炎介質。因此，透過降低發炎介質PGE2的合成，應可減輕發炎所產 生不適症狀，乃成為抗發炎藥物研發之目標。而研究中發現：以LPS誘發巨噬細胞 株表現COX-2 及生成PGE2下，苦瓜萃取物具有抑制PGE2生成的效應。因此，推測 苦瓜萃取物中可能含有抑制發炎反應的成分。故本研究擬以LPS活化之巨噬細胞為 模式，透過對萃及管柱層析等化學分離的方式，追蹤山苦瓜中能抑制PGE2合成的 區分物，以進一步分離並鑑定山苦瓜中具有此活性的成分。 將苦瓜以水萃取，渣再以乙酸乙酯萃取，兩種萃取物均有抑制活性，其中以 乙酸乙酯萃取物較高。將山苦瓜全果凍乾，以乙酸乙酯萃取；萃取物之抑制活性 可以正己烷對萃而得。正己烷區分物以矽膠層析，從100%正己烷逐漸增高極性至 100%乙酸乙酯沖提，而後再以90%乙酸乙酯與10%甲醇之混合溶劑沖提，可沖提 出活性最佳的區分物Fraction190。此區分物再經矽膠管柱層析，以氯仿/甲醇(6/1) 流洗，可分離出具活性之區分物F1-6。將F1-6 再度以矽膠管柱層析二次，所得之 活性區分物再以逆相管柱層析，得活性區分物RP-10，具極佳之抑制活性，IC50為 2.31µg/mL。以NMR、IR及H-H Cosy化學鑑定之結果為：含中短鏈脂肪酸之三酸甘 油酯。而將F1-6 水解後，尚可鑑定出當中含有：八碳雙酸、九碳雙酸及十碳雙酸。 此外，以3-20 碳之脂肪酸標準品測試發現：十碳之Capric acid (C10:0)具有最好的 抑制活性，50µM可達到完全抑制，IC50為6.46µM (1.216µg/mL)。八碳及九碳雙酸 標準品亦有部份抑制活性，但不如10 碳脂肪酸。富含中鏈脂肪酸之MCT oil經測 試亦有部份抑制活性。 綜此，推測山苦瓜中具有抑制巨噬細胞PGE2合成的可能成分為：酯化型中短 鏈飽和脂肪酸或雙酸。而山苦瓜中乙酸乙酯萃物或其他活性區分物中仍可能存在 其他具有活性的成分。