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    毛細管電泳/藍光雷射誘導螢光偵測法 對尿液中乳酸及3-羥丁酸之分析研究
    (2013) 洪榮華; Rong-Hua Hong
    乳酸和3-羥丁酸為體內正常有機代謝產物，但是當肝臟疾病或體內脂肪氧化代謝異常時，血液中乳酸和3-羥丁酸就會過度累積，而發生乳酸性中毒和酮酸中毒的現象。由於乳酸和3-羥丁酸僅有極低的紫外光吸收性質，且不容易以電噴灑質譜法進行偵測，而傳統酵素測定法偵測乳酸和3-羥丁酸則容易受到內生性物質的干擾而影響準確性。本研究以毛細管電泳/藍光雷射誘導螢光偵測法，偵測尿液中的乳酸濃度以作為臨床診斷酮酸中毒的參考數據。目前市面上沒有適合的螢光衍生試劑，因此本實驗合成4-N-(4-N-aminoethyl)piperazino-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole作為乳酸和3-羥丁酸的螢光衍生試劑。衍生過程需要使用催化劑TPP (triphenylphosphine) 和DPDS (2,2’-dipyridyl disulfide) 來幫助反應進行。若利用微波輔助衍生，可將衍生反應時間縮短為3分鐘。衍生物結構在低pH值環境下會進行質子化並放出螢光，對於分離乳酸和3-羥丁酸的衍生物而言，利用pH 值小於3的磷酸緩衝液且不需添加有機修飾劑、界面活性劑即可完全分離。當以藍光雷射為螢光激發光源時，最佳偵測條件下，偵測極限約為10 g/L。由於雷射誘導螢光檢驗法的靈敏度高，因此不需要利用線上濃縮技術。本研究選擇的真實樣品為尿液和唾液，其前處理經過去蛋白和稀釋即可進行衍生。檢測結果發現，正常人尿液中的乳酸濃度約為 39 ± 11 mg/L。藉由運動的方式增加醣類代謝和脂肪氧化速度，則尿液中代謝的乳酸濃度增加為231 ± 121 mg/L。進食前唾液樣品中乳酸濃度約為49 ± 16 mg/L，進食後唾液樣品中由於葡萄糖濃度上升增加轉醣酵素的代謝速率，代謝物乳酸濃度上升至192 ± 48 mg/L。本研究提供簡單、快速的分析技術並成功的應用在真實樣品的檢測。