Browsing by Author "Lin,Yu-Hsien"

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    以兩性離子親水層析法剖析唾液酸醣蛋白體
    (2016) 林育賢; Lin,Yu-Hsien
    唾液酸化在許多細胞的功能表現中扮演一個很重要的角色。由於低含量、唾液酸醣胜肽離子低游離效率以及在純化的過程中，常常會發現唾液酸會脫離醣胜肽，因此用來提升純化唾液酸醣蛋白專一性以及偵測極限的分析工具成為了學者們感興趣的題目。在這邊，我們使用了正電荷基團裸露在材料外側的兩性離子親水層析管柱(ZIC-cHILIC)來純化唾液酸醣胜肽，希望能夠提升正電荷基團與帶負電荷的唾液酸之間的電子交互作用力進而提升純化的效率。藉由使用兩性親水離子層析管柱搭配直接沖堤分析物的方法並且利用質譜儀進行偵測，我們分別使用65%、60%、55%、50%和40 % ACN 進行直接冲堤，鑑定到了117、104、108、 134、136和52條醣胜肽，其中含有82、76、86、97、95和37條唾液酸醣胜肽。另外，我們也進一步採取階段式冲堤分析物的方法，使用不同百分比的乙腈冲堤出不同梯度的分析物。我們透過了兩性親水離子層析管柱並且利用0%-70%的乙腈冲堤並結合五個梯度的分析物，可以將使用基質輔助雷色脫附游離飛行質譜儀偵測到的唾液酸醣胜個數共32條(質荷比區間在3000到7500)。除此之外，我們使用這個策略對非小型細胞肺癌細胞株之中的唾液酸醣蛋白體進行分析。在蛋白質體學的分析中，我們分別使用了MAGIC和Byonic軟體，分別鑑定到了751條、1349條唾液酸醣胜肽。不同類型的醣結構，分別由兩個、三個、四個分支組成，像是 (1) 分支中沒有岩藻醣或是末端有唾液酸醣修飾(2) 分支中有岩藻醣或是末端有唾液酸醣修飾(3) 分支中僅有末端唾液酸醣修飾。並且，在這些醣胜肽中包含了在非小型細胞肺癌細胞株中十分重要的蛋白質EGFR蛋白13個醣基化點中的9個。總括來說，我們使用了兩性離子親水層析管柱並且搭配階段式梯度冲堤法有效的提升了鑑定唾液酸醣胜肽的專一性，並且增加了蛋白質體的覆蓋率。