Browsing by Author "Huang Yu-Lun"

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    開發新穎的生物正交反應並評量唾液酸蛋白在細胞表面的視覺化
    (2011) 黃于倫; Huang Yu-Lun
    近年來逐漸發展出一種結合化學方法的生物標定成像工具，稱為Bioorthogonal chemical reporter，可以用於觀察一些生物分子在生物系統上的功能、代謝，例如蛋白質、核酸、醣類等。但這項工具應用於生理環境下存在著許多限制，由其對於標定醣類生物分子，至今只有疊氮化合物發展成很好的Bioorthogonal chemical reporter。 於是我們利用click chemistry、Diels–Alder reaction and addition-elimination這三個反應設計為唾液酸生合成細胞標定的Bioorthogonal反應，於是分別設計合成帶有疊氮、1,2,4,5-tetrazine以及1,2 diketone的甘露醣胺衍生物為Bioorthogonal chemical reporter (化合物5、45和55)，以及另一部份帶有螢光的反應化合物(16，39，48，52和62)。然而從這三個反應的合成過程中，成功突破了化合物35的反應性得到化合物45，也成功改善了化合物39的水溶性得到化合物48，但其中化合物48螢光基團對生物的緩衝液1X PBS溶解性不好而且對細胞染色並沒有專一性。不過最後成功合成出含有生物素的化合物52，可以穩定的存在於生物的環境中。接著和化合物45利用流式細胞儀去測試在MDA-MB-231乳癌細胞表面上的唾液酸標定量，但很可惜的並無成功的偵測到被標定的唾液酸，不過，藉由以上的經驗我們已經找到一個適合在生物環境中做Bioorthogonal reaction的方向，接下來只要在Bioorthogonal chemical reporter的設計上有所改良且能為唾液酸生合成之酵素所接受並催化，讓它能成功的表現在細胞表面，就可以順利表達出我們要標定的目標生物分子唾液酸。