Browsing by Author "Chia-Ying Lin"
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Item 脂族羥基酸修飾的金屬氧化物層析法(HAMMOC)搭配液相層析串聯式質譜分析技術(LC-MS/MS)之磷酸化蛋白質體研究(2014) 林佳穎; Chia-Ying Lin蛋白質磷酸化是一種主要的後轉譯修飾,它調節許多生物系統,如基因表現、訊號傳遞與代謝路徑。但磷酸化修飾為可逆反應且含量低,故需要高靈敏度與具特異性的分析方法。本研究結合脂族羥基酸修飾的金屬氧化物層析法(HAMMOC)與液相層析串聯式質譜分析技術(LC-MS/MS)研究磷酸化蛋白質體學。首先選用丙酮沉澱法與離心過濾法,以比較不同去鹽方法之磷酸化研究;接著於HAMMOC純化後,以等電點聚焦電泳(sIEF)、強陽離子交換層析法(SCX)與親水性層析法(HILIC)降低樣品複雜度,並比較不同分離方法之磷酸化研究;最後,採用無標記定量方法(label-free)進行磷酸化蛋白質體定量。取小鼠巨噬細胞株(RAW 264.7)裂解液,經離心過濾法以及丙酮沉澱法去鹽,毫克含量的蛋白質水解後搭配HAMMOC-sIEF與質譜分析,在兩種方法共鑑定到1231個磷酸化蛋白質與2953段磷酸化胜肽。以離心過濾法搭配HAMMOC與三種分離方法,結果顯示單一HAMMOC-SCX可以鑑定到1747段磷酸化胜肽,再搭配HAMMOC-sIEF和HAMMOC-HILIC可額外鑑定1517段(86.8%)磷酸化胜肽,由此可知三種分離方法具良好的互補性。從小鼠巨噬細胞株之控制組與脂多醣刺激組取200微克的蛋白質,以HAMMOC與LC-MS/MS利用無標記定量方法進行相對定量分析,從中挑選出114個差異表現的磷酸化蛋白質。以上結果顯示選用HAMMOC搭配LC-MS/MS適合深入研究磷酸化蛋白質體學的定性和定量分析。