Browsing by Author "Chen, Chien"

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    利用單分子螢光共振能量轉移技術探討RRM1具序列特異性的解旋能力
    (2019) 陳謙; Chen, Chien
    TAR 結合蛋白43 (TDP-43) 在真核生物細胞中的轉錄和轉譯過程中起著遺傳調控中有著重要的作用。非正常功能的 TDP-43 在人體內會形成類沉澱蛋白，此有毒物質生成漸凍人症 (amyotrophic lateral sclerosis, ALS) 以及腦前側顳額硬化症 (Frontotemporal lobar degeneration, FTLD)。過去研究發現，TDP-43 可作為一種 RNA/DNA 的結合蛋白 (binding protein)，其特定去結合 UG 的重複序列，尤其是位在靠近 3’ 端的囊性纖維化跨膜傳導調節因子 (Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, CFTR) 基因的第九段外顯子 (exon 9) 交接處；同時，TDP-43 具有 RNA 護伴蛋白 (chaperone) 的特性，能夠將雙股螺旋的 RNA 進行解旋 (unwinding)。TDP-43 的結構主要由 RRM1 (RNA recognition motifs)、RRM2、N-末端 (N-terminal domain, NTD) 以及富含甘胺酸 (glycine) 的 C-末端。其中，多項研究指出 RRM1 對於特定 DNA/RNA 序列有較高的結合能力。在此，我們利用單分子螢光共振能量轉移 (single-molecule fluorescence resonance energy transfer, smFRET) 技術來探討 RRM1 解旋 (unwinding) 雙股螺旋 DNA 的能力。實驗結果顯示 RRM1 將雙股螺旋的 TG：CA 重複序列解旋後，會持續停留在原 DNA 試樣上，藉由動力學分析得知解旋的速率決定步驟對 RRM1 的濃度為二級反應，顯示解旋需要兩個 RRM1 同時作用。當我們將 TG 重複序列增長時，RRM1 對 TG 雙股螺旋解旋的出現兩種相互競爭的反應路徑：分別為逐步 (stepwise) 以及直接 (direct) 路徑，且受 RRM1 濃度所調控。而當我們將序列接上非 TG 重複序列時，則沒有觀察到明顯的解旋現象，因此可推斷 RRM1 對序列具有選擇性。