Browsing by Author "謝育錚"

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    吳郭魚周邊血液單核球衍生之巨噬細胞單株抗體的建立與應用
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2014-12-??) 洪紹文; 謝育錚; 張鎮璿; 涂青宇; 林育興; 鄭清福; 陳明輝; 許添桓; 林荀龍; 王渭賢; Shao-Wen Hung, Yu-Cheng Hsieh, Chen-Hsuan Chang, Ching-Yu Tu, Yu-Hsing Lin, Chin-Fu Cheng, Ming-Hui Chen, Tien-Huan Hsu, Shiun-Long Lin, Way-Shyan Wang
    本實驗的目的在於製備抗吳郭魚周邊血液來源巨噬細胞的單株抗體。將培養後的貼附性吳郭魚周邊血液來源巨噬細胞免疫BALB/c 小鼠，以融合瘤技術將小鼠骨髓瘤細胞（NS-1 cells）與經過免疫之小鼠脾細胞融合成融合瘤細胞，再經三次極限稀釋，並以間接酵素連結免疫分析法 (indirect ELISA) 篩選出具有分泌抗體的融合瘤細胞，共得到八株單株抗體，分別命名為mAbM1-mAbM8。之後經抗體力價測試後發現mAbM1、mAbM2、mAbM6 及mAbM7 呈現高抗體力價。這四株單株抗體（mAbM1、mAbM2、mAbM6 及mAbM7）之後則進行抗體特性研究。先以免疫螢光染色法與流式細胞儀分析這四株單株抗體與週邊血液單核球來源、頭腎來源及脾臟來源之巨噬細胞的結合能力，發現mAbM1、mAbM2、mAbM6 及mAbM7 對週邊血液單核球來源巨噬細胞和頭腎來源巨噬細胞有很高的陽性細胞率 (最高可達80%)，與陰性對照組比較皆有顯著性差異 (p < 0.05)，尤其以mAbM6 和mAbM7 具有極顯著性差異 (p < 0.01)，但是對脾臟來源巨噬細胞的陽性細胞率與陰性對照組皆無極顯著的差異 (p > 0.05)。因此，再選取mAbM6 和mAbM7 這兩株單株抗體檢測與不同物種（日本鰻、鯉魚、小鼠、紐西蘭大白兔、雞、綿羊、狗及人類）之週邊血液巨噬細胞之結合能力，結果顯示日本鰻、小鼠、雞及羊的陽性細胞率與陰性對照組有極顯著差異 (p < 0.01) (可達40-60%)。此外，以間接螢光免疫染色法配合雷射共軛焦掃描顯微鏡分析，結果發現mAbM6 與mAbM7 所辨識的抗原皆分布在細胞膜上，抗體與抗原接合位置呈現帽狀或環狀。同時發現利用mAbM6 與mAbM7 間接免疫螢光染色法將新鮮的吳郭魚周邊血液白血球進行染色，再配合流式細胞儀細胞分選功能，成功地從周邊血液白血球區別出巨噬細胞。本實驗成功開發吳郭魚巨噬細胞之單株抗體，期望此抗體能作為分類不同魚類血球族群及未來魚類免疫學研究上之工具。