Browsing by Author "翁啟翔"

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    提高酵母菌 Pichia pastoris 蛋白表達系統的重組蛋白產量
    (2010) 翁啟翔; Chi-Hsiang Weng
    酵母菌 Pichia pastoris 已被廣泛應用於外源基因的蛋白表達。此系統具有將重組蛋白分泌至細胞外的特色，又 P. pastoris 本身產生之分泌性蛋白數量少，因而可以藉由簡單的方式，直接純化培養液中的重組蛋白。然而，並非所有重組蛋白本身含有之分泌性序列皆可於 P. pastoris 系統中具有功能，目前發展出許多不同之分泌性序列用以成功將重組蛋白分泌至 P. pastoris 細胞外。故取得高產量之分泌性重組蛋白，首先則必須找尋一最合適之分泌性序列。本研究係藉由篩選九種不同的分泌性訊號序列，找尋一具有高效率的訊號序列，來提高分泌至細胞外的重組蛋白以增加產量，並以 Candida rugosa lipase 作為表達之重組蛋白，利用 lipase 活性測試來篩選出最佳之訊號序列。研究結果發現，該重組蛋白最合適之分泌性序列為來自 Gallus gallus lysozyme 之分泌性訊號序列。此結果顯示，lysozyme 之分泌性訊號序列有助於提升 C. rugosa lipase 在 P. pastoris 表達產量，其活性分析結果為 37 unit / ml，與表現量最差者相差 10 倍。同時，此篩選系統亦可應用於其他重組蛋白於 P. pastoris 系統中的表達，以提升重組蛋白之產量。