Browsing by Author "王秀觀"

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    反轉錄病毒起動子捕捉載體之製造
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 1995-10-??) 王秀觀; 李桂楨; 張雯; H.K.Wang,G..J.Lee-Chen,W.Chang
    本實驗的目的，在改良反轉錄病毒起動子捕捉載體，以其更有效率的捕捉細胞基因的起動子。U3β-geo/supF質體3端不帶有促進子的LTR的U3區插入了在同一解讀架構上的-galactosidase(β -gal)和neomycmphosphotransferase (neo)的雜合標識基因(簡稱3 -geo)。我們將u3 β -geo/supF質體3端U3區之起動子序列切除，得到L1 u3 β -geo/supF質體，以去除起始於5端LTR而終止於3端LTR的轉錄，進而提高起動子捕捉的效率。此外，我們以pBR322質體支複製起原點(ort)及β-lactamase基因(amp)置換 U3β -geo/supF質體之supF基因，，得到L1 U3β -ge%ri-amp質體，此法有利於病毒插入處鄰近細胞序列的選殖。將各重組質體轉移入2 細胞，得到重組病毒製造細胞株，其病毒價數，可將感染NIH3T3細胞來測定。U3β -geo/supF 重負組病毒感染之細胞生長良好 緻密，有較多大型細胞株形成。切除U3區之起動子的重組病毒感染之細胞則生長緩慢 不緻密，大型細胞株很少。U3 β-geo/supF 重組病毒價數與其他已知之鼠類白血病毒價數相近，故推論在LTR插入3.9-kb β-geo基因並不會影響病毒的複製 插入或包裝 oU3 β –geo/ori-amp 重組病毒價數則降低50% 。故推論pBR322質體之ori-amp基因上的有毒序列可能會影響病毒的複製或插入，或者ori-amp基因之置入，使病毒增長2.1 Kb，可能造成病毒包裝的的難而導致病毒價數的降低。
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    台灣人族群阿茲海默氏症及血管型失智症的生物標記評估
    (2009) 王秀觀; Hsiu-Kuan Wang
    阿茲海默症與血管型失智症是最普遍的兩類失智症。目前有關阿茲海默症的疾病診斷生物標記分子研究中，已知的遺傳標記分子有脂蛋白E基因4對偶基因、類澱粉蛋白前驅蛋白基因突變、早老素1及早老素2基因突變等。腦部及腦脊髓液中tau蛋白與類澱粉蛋白含量則為已確認的阿茲海默症疾病診斷蛋白標記分子。本研究利用台灣阿茲海默症、血管型失智症與正常人族群基因分型技術，分析候選基因多型性變異與疾病的相關性。結果發現脂蛋白E基因4對偶基因是阿茲海默症、而非血管型失智症的風險因子；血管收縮素轉換酶基因DD基因型、D對偶基因和-240 T – Alu D單套型是阿茲海默症與血管型失智症的風險因子；此外，實驗結果顯示介白素1基因-889 CT基因型對於70歲以上的血管型失智症罹病感受方面具有潛在的保護功能；同時，熱休克A5基因-415 AA/-180 GG基因型、-415 A/-180 G對偶基因會減低罹患阿茲海默症的風險。基因表現分析結果亦顯示，具有-415 A/-180 G對偶基因的細胞在遭受內質網壓力之後，其熱休克A5蛋白被誘發產生的程度明顯增加。由於尋找阿茲海默症淋巴細胞的生物標記的可行性，本論文亦分析了8個阿茲海默症及4個年齡、性別配合之正常人的APP蛋白型式及氧化蛋白，但未找到明顯的蛋白標記。以上實驗結果顯示，上述與阿茲海默症及/或血管型失智症的罹病相關的基因，可作為協助疾病診斷的遺傳標記分子。