Browsing by Author "溫偉伶"

Filter results by typing the first few letters
Now showing 1 - 1 of 1
  • No Thumbnail Available
    Item
    組蛋白去乙醯酶抑制劑抑制肺癌細胞生長之機制探討
    (2007) 溫偉伶; Wei-Ling Wen
    目的：前人研究顯示，在一些固體或血液腫瘤中，組蛋白去乙醯酶 (Histone deacetylases, HDACs) 常不正常活化；故引發出在癌症的治療中將 HDAC 作為癌症治療標靶的想法。本研究即探討新穎HDAC抑制劑：HDAC-44 與 HTPB 是否可以有效的抑制肺癌細胞的生長，以及其抑制癌細胞生長的分子機制。材料與方法：利用 trypan blue exclusion 的方法檢測 HDAC-44 與 HTPB 單獨處理下，對正常細胞或肺癌細胞的細胞毒殺性；或是將 HDAC-44 與 cisplatin 共同處理肺癌細胞株，檢測其對肺癌細胞株是否有加成性的細胞毒殺性；使用流式細胞儀 (flow cytometry) 檢測 HDAC 抑制劑是否會影響細胞週期的分佈；利用 DNA 片斷化分析 (DNA ladder assay) 確認 HDAC 抑制劑是否誘導細胞凋亡 (cell apoptosis)；以細胞免疫染色的方式 (immunocytochemical analysis) 分析 HDAC 抑制劑使否會改變細胞骨架的結構；且利用反轉錄聚合酶鏈鎖反應 (RT-PCR) 與西方點墨法 (Western blot analysis) 分析 HDAC 抑制劑是否會影響肺癌細胞株各種目標基因其mRNA與蛋白質表達，或是影響蛋白質的乙醯化程度；接著，利用細胞質免疫沉澱 (Chromatin immunoprecipitation, ChIP)、細胞質免疫沉澱晶片分析(ChIP-on-chip)，大規模尋找 HDAC 抑制劑直接影響的新穎目標基因。結果：新穎的 HDAC 抑制劑可以有效的促使組織蛋白 H3 與 H4 與非組織蛋白 p53 的蛋白質乙醯化；此外其也可以有效誘導 p21WAF1/Cip1 與 Tissue inhibitor of metalloproteinase-3 (TIMP-3) 等基因的轉錄活化。新穎的 HDAC 抑制劑，HDAC-44 與 HTPB，可以有效的促使肺癌細胞株死亡 (HDAC 44對H1299的IC50為1.09 μM、HDAC 44對A549的IC50為0.64 μM、HDAC 44對CL1-1的IC50為0.67 μM、HTPB對H1299的IC50為2.99 μM、HTPB對A549的IC50為1.60 μM、HTPB對CL1-1的IC50為2.78 μM、SAHA對H1299的IC50為4.59 μM、SAHA對A549的IC50為1.89 μM、SAHA對CL1-1的IC50為2.86 μM)，但是對正常細胞株則沒有明顯的細胞毒殺性。將低劑量 HDAC-44 與 cisplatin 共同處理肺癌細胞株，發現對肺癌細胞有加成性的毒殺效果。HDAC-44 與 HTPB 可導致肺癌細胞株的細胞週期停在 G2/M 期並且導致細胞凋亡的現象，如：DNA ladder 與抗細胞凋亡的 Bcl2 蛋白質表達量下降。將肺癌細胞處理 HDAC-44 後，會導致細胞骨架蛋白 a-tubulin 的不正常分佈並且抑制癌細胞的細胞質分裂。ChIP-on-chip分析的結果顯示，HDAC抑制劑可以專一性的在三種測試癌細胞將一些 CpG island 乙醯化，這些 CpG island 所屬之基因可做為未來 HDAC 抑制劑的抗癌機制之目標基因群。結論： HDAC-44 與 HTPB 極具有潛力成為新穎的抗肺癌藥物，而HDAC抑制劑對其他種類的癌症影響也很值得做進一步的研究。