Browsing by Author "游舒琇"

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    人類海藻糖水解酶重組蛋白之表達
    (2014) 游舒琇; Shu-Hsiu Yu
    海藻糖 (trehalose) 是一種非還原性的雙糖，由兩個葡萄糖分子以 α,α-1,1- 糖苷鏈結形成，存在於多種生物體中，除了可以做為生物能量來源，亦有穩定蛋白質與細胞膜等重要生理功能。海藻糖水解酶 α,α-Trehalase (TreH) (EC 3.2.1.28)，可將海藻糖水解成兩個葡萄糖，廣泛的存在於微生物與動植物中。人體不同組織中亦含有 TreH，例如小腸與腎臟絨毛膜的 TreH 負責海藻糖的水解以利吸收，另外，血漿中亦含有TreH，有研究顯示血漿中具有高 TreH 活性的人較容易罹患糖尿病。然而，目前為止對於人類 TreH 的生化特性、功能與結構的研究非常稀少。本研究將選殖的兩種人類海藻糖水解酶 isoform1 (hTreH1) 和 isoform2 (hTreH2) 的基因，利用三種蛋白表達系統，包括原核生物的大腸桿菌 (Escherichia coli) 表達系統、真核生物的畢赤酵母菌 (Pichia pastoris) 表達系統和昆蟲桿狀病毒表達系統 (baculovirus expressing vector system)，以便生產具功能性的重組酵素。其中，兩種 hTreHs 在大腸桿菌表達都形成不可溶的內涵體，以隨機突變技術篩選 80 個突變株，並未獲得可表達水溶性酵素之突變株；在畢赤酵母菌表達出的胞外重組酵素量極微，在培養液中無法偵測到 TreH 活性；而在昆蟲桿狀病毒表達系統中有表達出重組酵素，但是仍然形成不可溶的蛋白沉澱。部分可溶的重組蛋白可以非變性的蛋白萃取條件萃出，然而這些萃出的重組蛋白還是不具活性。本研究所採用的方法中沒有表達出具有活性的重組蛋白，為了得到可溶且具有活性的重組蛋白，需要再進一步做更深入的研究。