Browsing by Author "涂青宇"

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    2003-2004年臺灣地區乳牛和魚類來源鏈球菌之抗菌劑感受性研究
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2007-12-??) 洪紹文; 王淑玲; 涂青宇; 蔡岳智; 莊士德; 謝孟通; 何素鵬; 王渭賢
    本研究目的在調查臺灣地區動物（乳牛和魚類）來源鏈球菌對數種抗菌劑之感受性。2003年至2004年共收集248株鏈球菌，利用藥物感受性試驗檢測對azithromycin (Azi)、clarithromycin (Clar)、erythromycin (Ery)、spiramycin (Spir)、amoxicillin (Amo)及enrofloxacin (Enro) 是否具有抗藥性?結果顯示248株鏈球菌對Spir 的抗藥性最高(100％)，其餘藥物感受性之次依序為：Enro(98.4％)、Clar(87.5％)、Ery(54.8％)、Azi(31.9％)及Amo(21.8％)。研究發現鏈球菌之抗藥性類型：由哺乳類分離之鏈球菌株以Azi-Clar-Ery-Spirr所佔比例最高 (27.5％)，然而由水生動物分離之鏈球菌以Spirr 所佔比例最高 (55.1％)。
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    Ciprofloxacin藥物酵素連結免疫吸附法殘留檢驗試劑之開發
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2007-12-??) 林毓芬; 洪紹文; 陳柏叡; 鄒禮澤; 涂青宇; 張鎮璿; 何素鵬; 王渭賢
    本研究目的在於開發直接競爭型酵素連結免疫吸附法，期能精確、簡單及快速檢測禽畜水產品中ciprofloxacin (Cipro)殘留之檢測試劑。實驗結果顯示利用N-hydroxysuccinimide ester法可成功製備Cipro-human serum albumin (HSA)之結合蛋白，同時以相同的方法可以分別成功製備出藥物-bovine serum albumin結合蛋白和藥物-horseradish peroxidase之結合體。另外，利用高效液相層析法(high performance liquid chromatography)搭配紫外光和螢光檢測器可以檢測藥物-HSA結合體。運用所製備之Cipro-HSA之結合蛋白以皮下免疫紐西蘭白兔六次後，可成功誘導產生多株抗體，力價高達65,536倍以上。收集多株抗體並製備成直接競爭型ELISA盤後，在磷酸緩衝液 (PBS)中的最低檢測極限為0.78 ppb，而在牛奶、fetal bovine serum、吳郭魚肉、猪肉、雞肉、蝦肉及牛肉中分別為1.08 ppb、1.37 ppb、0.83 ppb、1.1 ppb、0.88 ppb、1.32 ppb 及1.14 ppb，故所開發試劑的敏感度相當高，未來應可用於臨床Cipro殘留之檢測。在精確度方面，Cipro檢測盤之組內(intra-assay)與組間 (inter-assay)檢測變異值分別為5.82％和7.38％，顯示Cipro檢測盤精確度高。此外，本檢測盤對enrofloxacin和norfloxacin有較高的反應率外，對其餘抗菌劑皆小於0.2％。
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    吳郭魚周邊血液單核球衍生之巨噬細胞單株抗體的建立與應用
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2014-12-??) 洪紹文; 謝育錚; 張鎮璿; 涂青宇; 林育興; 鄭清福; 陳明輝; 許添桓; 林荀龍; 王渭賢; Shao-Wen Hung, Yu-Cheng Hsieh, Chen-Hsuan Chang, Ching-Yu Tu, Yu-Hsing Lin, Chin-Fu Cheng, Ming-Hui Chen, Tien-Huan Hsu, Shiun-Long Lin, Way-Shyan Wang
    本實驗的目的在於製備抗吳郭魚周邊血液來源巨噬細胞的單株抗體。將培養後的貼附性吳郭魚周邊血液來源巨噬細胞免疫BALB/c 小鼠，以融合瘤技術將小鼠骨髓瘤細胞（NS-1 cells）與經過免疫之小鼠脾細胞融合成融合瘤細胞，再經三次極限稀釋，並以間接酵素連結免疫分析法 (indirect ELISA) 篩選出具有分泌抗體的融合瘤細胞，共得到八株單株抗體，分別命名為mAbM1-mAbM8。之後經抗體力價測試後發現mAbM1、mAbM2、mAbM6 及mAbM7 呈現高抗體力價。這四株單株抗體（mAbM1、mAbM2、mAbM6 及mAbM7）之後則進行抗體特性研究。先以免疫螢光染色法與流式細胞儀分析這四株單株抗體與週邊血液單核球來源、頭腎來源及脾臟來源之巨噬細胞的結合能力，發現mAbM1、mAbM2、mAbM6 及mAbM7 對週邊血液單核球來源巨噬細胞和頭腎來源巨噬細胞有很高的陽性細胞率 (最高可達80%)，與陰性對照組比較皆有顯著性差異 (p < 0.05)，尤其以mAbM6 和mAbM7 具有極顯著性差異 (p < 0.01)，但是對脾臟來源巨噬細胞的陽性細胞率與陰性對照組皆無極顯著的差異 (p > 0.05)。因此，再選取mAbM6 和mAbM7 這兩株單株抗體檢測與不同物種（日本鰻、鯉魚、小鼠、紐西蘭大白兔、雞、綿羊、狗及人類）之週邊血液巨噬細胞之結合能力，結果顯示日本鰻、小鼠、雞及羊的陽性細胞率與陰性對照組有極顯著差異 (p < 0.01) (可達40-60%)。此外，以間接螢光免疫染色法配合雷射共軛焦掃描顯微鏡分析，結果發現mAbM6 與mAbM7 所辨識的抗原皆分布在細胞膜上，抗體與抗原接合位置呈現帽狀或環狀。同時發現利用mAbM6 與mAbM7 間接免疫螢光染色法將新鮮的吳郭魚周邊血液白血球進行染色，再配合流式細胞儀細胞分選功能，成功地從周邊血液白血球區別出巨噬細胞。本實驗成功開發吳郭魚巨噬細胞之單株抗體，期望此抗體能作為分類不同魚類血球族群及未來魚類免疫學研究上之工具。