Browsing by Author "段立平"

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    免疫沉澱法搭配質譜技術對前列腺癌特異性抗原前體異構物定量分析以改善前列腺癌之偵測
    (2013) 段立平; Li Ping Tuan
    前列腺特異性抗原 (PSA) 是目前最成功且廣泛使用的前列腺癌 (PCa) 血清標誌物。但在重要診斷指標PSA濃度4~10 ng/mL的範圍內，它具有有限的能力在區分早期的前列腺癌與良性前列腺增生症 (BPH)，缺乏癌症特異性。近年來研究發現前列腺特異性抗原前體 (proPSA) 與前列腺癌更具相關性。ProPSA是血清游離PSA的特殊形式，由天然proPSA及其各種截斷的亞型組成，[-2] proPSA、[-5] proPSA及[-7] proPSA，而其各種截斷的亞型分子已被發現比天然proPSA與癌症有更好的相關性。(不是說不要分段嗎?)多反應監測質譜技術 (MRM-MS) 近年來頻繁地被應用於測量低含量的組織和生物體液中的生物標誌物，由於其高靈敏度和高特異性，實驗設計簡單和高度重複性。本研究建立一套利用免疫沉澱法搭配質譜多反應監測掃描技術之優化方法，檢測定量血清樣品中mature PSA、proPSA及truncated proPSA ([-5] proPSA)，藉此改善PSA對前列腺癌偵測之特異性。由於血清和血漿是目前最複雜的生物樣品，針對此，我們特別對免疫沉澱步驟當中所使用之實驗用管柱及緩衝溶液進行優化測試，以達到較高之純化效率，並且使用不同純化策略-免疫親和去除法¬比較純化目標蛋白質之效率。實驗結果證明此研究策略可有效純化血清中proPSA且定量檢測結果呈現良好之線性關係，proPSA及mature PSA的R2 >0.99，[-5] proPSA的R2 >0.99，偵測極限 (LOD) 和定量極限 (LOQ) 皆可達到proPSA濃度ng/mL的範圍內，對應血清中含量最高蛋白質的濃度，濃度低於6個數量級。此外，本研究策略在一次LC-MRM-MS實驗分析中可以檢測多個生物標誌物，包括成熟和前體形式的PSA。本研究開發此方法提供一個具吸引力的替代方案，藉由檢測定量血清樣品中proPSA及truncated proPSA以改善PSA對前列腺癌偵測之特異性。