Browsing by Author "戴珮琳"

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    利用化學標定及質譜技術分析經脂多醣刺激後小鼠巨噬細胞 (RAW 264.7) 之比較分泌蛋白質體研究
    (2013) 戴珮琳; Pei-Lin Tai
    脂多醣(lipopolysaccharide, LPS)是革蘭氏陰性菌細胞壁外膜上一複雜醣脂分子，對於哺乳動物具有毒性，會誘使強烈的發炎反應並產生許多細胞激素，若過度的大量表現，則會導致敗血症和感染性休克。在此篇研究中，我們採用同重元素相對和絕對定量(iTRAQ)的標定策略及質譜技術，分析LPS刺激後小鼠巨噬細胞(RAW 264.7)分泌的蛋白質。為了降低樣品的複雜度並提高鑑定蛋白質的動態範圍以及其序列覆蓋率，在送入奈米級液相層析質譜分析前會先結合強陽離子交換層析法(SCX)或OFFGEL等電聚焦分離技術對iTRAQ標定胜肽進行分離。本實驗共鑑定及定量654種蛋白質，這些蛋白質絕大多數和細胞過程以及調控相關，其中52個蛋白質在LPS刺激後具有顯著表現量的差異。我們從中篩選出經LPS刺激後含量具有顯著上升的蛋白質serglycin進行進一步的研究，利用西方墨點法(Western blot)驗證確認在離體細胞培養液以及活體小鼠血清中證實LPS可以活化serglycin的表現。由於探討LPS刺激RAW 264.7產生的分泌蛋白質的研究不多，因此本研究所鑑定出表現差異蛋白質對於LPS刺激後巨噬細胞產生發炎相關反應提供更多的瞭解。