Browsing by Author "張佑瑋"

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    硫辛酸影響小鼠腦微膠細胞株BV-2對寡聚態乙型類澱粉樣蛋白吞噬作用之研究
    (2015) 張佑瑋; Chang, Yu-Wei
    本研究探討維生素B群、硫辛酸與牛磺酸等對小鼠腦微膠細胞株(microglia) BV-2吞噬及清除寡聚態類澱粉樣蛋白(oligomeric beta-amyloid, oAβ1-42)之影響，評估這些營養素是否能藉由降低過多的oAβ1-42堆積以延緩阿茲海默氏症之進展。 實驗首先建立體外小鼠微膠細胞株BV-2攝入oAβ1-42之細胞模式。將Aβ1-42粉末溶於F12 medium中24小時進行聚集反應以製備oAβ1-42。穿透式電子顯微鏡(transmission electron microscopy, TEM)型態觀察顯示所製備的oAβ1-42為聚集型球狀構造；以分析型超高速離心機(analytical ultracentrifugation, AUC)進行沉降係數分析，結果顯示製備的oAβ1-42分子量大多介於100-300 kDa之間。在細胞實驗方面，MTT分析結果發現，在0.1 mM的樣品濃度下測試樣品thiamin、riboflavin、nicotinamide、pyridoxine、cobalamin、folic acid、taurine、α-lipoic acid (ALA)對BV-2細胞皆無明顯之毒性產生。接著，以此樣品濃度處理經1 μM螢光分子標定的oAβ1-42 (FAM-oAβ1-42) 共培養24小時之小鼠微膠細胞株BV-2以進行攝入試驗，結果發現，在所有樣品中以ALA對BV-2細胞具有最佳的促進攝入FAM-oAβ1-42之效果。進一步以real-time PCR對microglia細胞表面上與oAβ吞噬作用相關之接受器(receptor)，包括scavenger receptor A1 (SR-A1)、scavenger receptor B1 (SR-B1)、CD36、receptor for advanced glycation end-products (RAGE)之基因表現進行分析。結果發現，與 oAβ1-42共同培養的BV-2細胞其CD36基因表現會隨著ALA處理濃度增加而升高，然而其他接受器則無；再則，以ALA處理未與oAβ1-42共同培養的BV-2細胞時也觀察到其CD36基因的表現有上升之情形。免疫細胞染色法(immunocytochemistry, ICC)結果顯示，無論是否與oAβ1-42共同培養，ALA的處理均會增加BV-2細胞CD36接受器之表現量，但添加CD36接受器阻斷劑(CD36抗體)則會顯著地減少ALA提升BV-2細胞對FAM-oAβ1-42之攝入能力。ICC分析結果亦發現，ALA處理會增加BV-2細胞中CD36的轉錄因子PPAR-γ (peroxisome proliferator-activated receptor-γ)之轉位作用(translocation)。Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)分析發現，ALA處理會增加BV-2細胞對15-deoxy-△12,14- prostaglandin J2的產生。Real-time PCR以及western blotting分析結果發現，經ALA處理的BV-2細胞其COX-2基因與蛋白質之表現均有明顯增加之趨勢。根據上述結果，我們推測ALA可能是透過COX-2/15-deoxy-△12,14-prostaglandin J2/PPAR-γ/CD36路徑，提升BV-2細胞膜上CD36接受器之表現、增加其對oAβ1-42進行辨識，進而促進對oAβ1-42之吞噬作用。